| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 里氏木霉与纤维素酶表达体系 | 第10-11页 |
| 1.2 里氏木霉纤维素酶系的组成 | 第11-12页 |
| 1.3 里氏木霉碳代谢阻遏物(碳阻遏抑制因子) | 第12-14页 |
| 1.4 里氏木霉纤维素酶基因的表达与调控 | 第14-15页 |
| 1.5 siRNA干扰系统在丝状真菌中基因表达调控的应用研究 | 第15-16页 |
| 1.6 研究目的与内容 | 第16-17页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第16页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 沉默cre1基因载体的构建与鉴定 | 第17-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.3 仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 碳代谢阻遏物cre1基因干扰片段的设计与合成 | 第19-21页 |
| 2.2.2 干扰表达盒的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.3 里氏木霉原生质体转化 | 第22-23页 |
| 2.2.4 里氏木霉基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 cre1干扰载体载体转化子的鉴定 | 第24页 |
| 2.2.6 RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.7 RNA反转录 | 第25-26页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR | 第26页 |
| 2.2.9 酶活测定 | 第26-29页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第29-37页 |
| 2.3.1 里氏木霉siRNA干扰表达盒的完整性检测 | 第29-30页 |
| 2.3.2 干扰重组菌的纤维素酶酶活的测定 | 第30-32页 |
| 2.3.3 干扰重组菌总RNA的提取和转录水平的cre1相对表达量分析 | 第32-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 多靶向沉默里氏木霉碳代谢阻遏物对纤维素酶表达的调控研究 | 第39-63页 |
| 3.1 材料及主要试剂 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-47页 |
| 3.2.1 多靶向沉默片段的选择与合成 | 第39-43页 |
| 3.2.2 多靶向沉默载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.3 里氏木霉原生质体转化 | 第44页 |
| 3.2.4 里氏木霉基因组DNA提取 | 第44-45页 |
| 3.2.5 多靶向沉默载体转化子的鉴定 | 第45页 |
| 3.2.6 RNA提取 | 第45页 |
| 3.2.7 RNA反转录 | 第45页 |
| 3.2.8 荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 3.2.9 酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第47-59页 |
| 3.3.1 编码多靶向siRNA寡核苷酸片段的合成及质粒DNA的获得 | 第47页 |
| 3.3.2 多靶向沉默转化子鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 里氏木霉原生质体转化子的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.4 纤维素酶活性的测定 | 第49-52页 |
| 3.3.5 干扰重组菌RT-qPCR实验结果 | 第52-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-76页 |
| 附录A 关键序列测序结果图 | 第70-72页 |
| 附录B 英文缩略词 | 第72-73页 |
| 附录C 荧光定量PCR相关融解曲线图 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 硕士学位攻读期间的研究成果 | 第77页 |
