| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13页 |
| 第一章 前言 | 第14-30页 |
| 1 细胞凋亡 | 第14-22页 |
| 1.1 细胞凋亡简介 | 第14页 |
| 1.2 细胞凋亡的特征 | 第14-15页 |
| 1.3 凋亡的机制研究 | 第15-19页 |
| 1.3.1 外源诱导途径 | 第15-17页 |
| 1.3.2 内源途径 | 第17-19页 |
| 1.4 调控凋亡蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4.1 凋亡抑制蛋白 | 第19页 |
| 1.4.2 p53蛋白 | 第19-20页 |
| 1.5 凋亡的执行 | 第20-22页 |
| 1.5.1 caspase家族 | 第20-21页 |
| 1.5.2 凋亡小体形成 | 第21-22页 |
| 2 铁与细胞代谢 | 第22-27页 |
| 2.1 铁与人体健康 | 第22-23页 |
| 2.2 细胞内铁调节 | 第23-27页 |
| 2.2.1 细胞摄入铁 | 第23-24页 |
| 2.2.2 细胞内铁储存 | 第24页 |
| 2.2.3 铁蛋白 | 第24-25页 |
| 2.2.4 铁平衡 | 第25-26页 |
| 2.2.5 细胞铁调控 | 第26页 |
| 2.2.6 铁过载 | 第26-27页 |
| 3 活性氧簇ROS | 第27-28页 |
| 3.1 细胞内铁与ROS关系 | 第28页 |
| 4 本项目研究目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-47页 |
| 1 实验材料 | 第30-32页 |
| 1.1 细胞株 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂和药品 | 第30-31页 |
| 1.3 主要实验器材 | 第31-32页 |
| 1.4 质粒载体以及shRNA序列 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-47页 |
| 2.1 质粒构建 | 第32-35页 |
| 2.1.1 PCR目标片段扩增与连接 | 第32-34页 |
| 2.1.2 质粒转化 | 第34-35页 |
| 2.2 质粒提取 | 第35-36页 |
| 2.2.1 质粒小量提取 | 第35-36页 |
| 2.2.2.1 质粒小量提取鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3 质粒中量提取 | 第36-37页 |
| 2.4 细胞培养 | 第37-38页 |
| 2.4.1 细胞复苏 | 第37页 |
| 2.4.2 细胞培养 | 第37页 |
| 2.4.3 细胞传代 | 第37页 |
| 2.4.4 细胞冻存 | 第37-38页 |
| 2.5 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.5.1 磷酸钙转染 | 第38页 |
| 2.5.2 Entranster D4000转染 | 第38页 |
| 2.5.3 慢病毒包装 | 第38-39页 |
| 2.6 Western Blot | 第39-41页 |
| 2.6.1 蛋白电泳: | 第40页 |
| 2.6.2 蛋白电转: | 第40-41页 |
| 2.7 基因转录水平检测 | 第41-42页 |
| 2.7.1 RNA提取 | 第41页 |
| 2.7.2 逆转录 | 第41-42页 |
| 2.7.3 real-time检测基因转录水平 | 第42页 |
| 2.8 流式细胞术 | 第42-43页 |
| 2.8.1 流式检测细胞存活 | 第42页 |
| 2.8.2 流式检测细胞ROS | 第42页 |
| 2.8.3 流式检测细胞凋亡 | 第42-43页 |
| 2.8.4 线粒体膜电位检测 | 第43页 |
| 2.9 细胞组分分离 | 第43-45页 |
| 2.9.1 Digitonin破膜分离细胞色素C | 第43-44页 |
| 2.9.2 Thermo线粒体分离试剂盒提取线粒体 | 第44-45页 |
| 2.9.3 细胞核浆分离 | 第45页 |
| 2.10 细胞免疫荧光 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-64页 |
| 1 FeSO_4与CCCP诱导细胞死亡 | 第47-51页 |
| 1.1 FeSO_4与CCCP联用引起细胞死亡 | 第47-49页 |
| 1.2 游离Fe能够增强CCCP药效诱导细胞死亡 | 第49-51页 |
| 2 ROS是启动细胞死亡的关键 | 第51-53页 |
| 3 线粒体参与细胞死亡信号传导 | 第53-61页 |
| 3.1 线粒体去极化传递死亡信号 | 第53-56页 |
| 3.2 线粒体缺失的细胞不再响应细胞死亡 | 第56-57页 |
| 3.3 FeSO_4与CCCP诱导细胞色素C释放到胞浆 | 第57-58页 |
| 3.4 Bax介导细胞色素C释放 | 第58-60页 |
| 3.5 ROS清除剂抑制细胞色素C的释放 | 第60-61页 |
| 4 Caspases激活导致细胞执行死亡 | 第61-64页 |
| 4.1 ROS清除剂阻断凋亡执行 | 第62页 |
| 4.2 FTL与FTH1可以拮抗细胞凋亡 | 第62-64页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |