| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第1章 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 EV-D68生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.2 流行病学 | 第11-12页 |
| 1.3 EV-D68感染的临床特征 | 第12-13页 |
| 1.4 EV-D68的诊断与治疗 | 第13-14页 |
| 1.5 反向遗传学 | 第14-15页 |
| 1.6 研究意义与思路 | 第15-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-43页 |
| 2.1 病毒、细胞株、质粒与抗体 | 第17页 |
| 2.2 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.3 引物合成与测序 | 第19页 |
| 2.4 主要仪器 | 第19-21页 |
| 2.5 主要试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.5.1 完全PBS工作液 | 第21页 |
| 2.5.2 DEPC水 | 第21页 |
| 2.5.3 50x TAE储存液 | 第21页 |
| 2.5.4 1x TAE工作液 | 第21-22页 |
| 2.5.5 1%琼脂糖凝胶 | 第22页 |
| 2.5.6 LB固体培养基 | 第22页 |
| 2.5.7 LB液体培养基 | 第22页 |
| 2.5.8 SDS-PAGE电泳液（10×） | 第22页 |
| 2.5.9 半干转膜缓冲液储存液（10×） | 第22-23页 |
| 2.5.10 半干转膜缓冲液（1×） | 第23页 |
| 2.5.11 4×Loading Buffer | 第23页 |
| 2.5.12 RIPA lysis buffer | 第23页 |
| 2.6 引物 | 第23-25页 |
| 2.7 实验方法 | 第25-43页 |
| 2.7.1 真核细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.7.2 病毒的培养和TCID50测定 | 第26-27页 |
| 2.7.3 构建EV-D68微复制子 | 第27-35页 |
| 2.7.4 DNA转染（以24孔板为例） | 第35页 |
| 2.7.5 体外转录 | 第35-36页 |
| 2.7.6 RNA转染 | 第36页 |
| 2.7.7 双报告基因检测 | 第36-37页 |
| 2.7.8 实时定量荧光PCR | 第37页 |
| 2.7.9 构建EV-D68感染性克隆 | 第37-38页 |
| 2.7.10 病毒的拯救 | 第38-39页 |
| 2.7.11 蛋白质免疫印迹法（Western Blot） | 第39-40页 |
| 2.7.12 蚀斑实验 | 第40页 |
| 2.7.13 病毒生长曲线测定 | 第40-41页 |
| 2.7.14 数据分析 | 第41-43页 |
| 第3章 实验结果 | 第43-63页 |
| 3.1 EV-D68微复制子的构建及应用 | 第43-50页 |
| 3.1.1 T7系统EV-D68微复制子的构建 | 第43-45页 |
| 3.1.2 PolI系统EV-D68_(Fermon)微复制子的构建 | 第45-46页 |
| 3.1.3 T7和PolI系统微复制子的拯救 | 第46-47页 |
| 3.1.4 EV-D68非编码区对病毒蛋白表达的影响 | 第47-49页 |
| 3.1.5 Poly(A)尾对微复制子活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.2 EV-D68_(Fermon)感染性克隆的构建及应用 | 第50-58页 |
| 3.2.1 EV-D68_(Fermon)感染性克隆的构建 | 第50-54页 |
| 3.2.2 Rg EV-D68_(Fermon) G394C病毒的拯救 | 第54-55页 |
| 3.2.3 拯救病毒Rg EV-D68_(Fermon)G394C的性质鉴定 | 第55-58页 |
| 3.3 G394位点对病毒非编码区功能起重要作用 | 第58-63页 |
| 3.3.1 G394C突变在微复制子中影响报告基因的翻译 | 第58-59页 |
| 3.3.2 RgEV-D68_(Fermon)病毒的拯救及性质鉴定 | 第59-63页 |
| 第4章 讨论 | 第63-67页 |
| 论文总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
