| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 GPCR概述 | 第14页 |
| 1.2 GPCR下游信号通路 | 第14-17页 |
| 1.2.1 G蛋白转导的信号通路 | 第14-16页 |
| 1.2.2 Arrestin信号通路 | 第16-17页 |
| 1.3 B类GPCRs | 第17-20页 |
| 1.3.1 B类GPCRs概况 | 第17-18页 |
| 1.3.2 B类GPCRs的分类 | 第18页 |
| 1.3.3 B类GPCRs结构研究现状 | 第18-20页 |
| 1.4 科学问题与研究意义 | 第20-22页 |
| 1.5 研究路线与方法 | 第22-25页 |
| 1.5.1 PTH1R的结构解析与药物作用位点研究 | 第22-23页 |
| 1.5.2 PTH2R的结构解析与药物作用位点研究 | 第23-25页 |
| 第二章 甲状旁腺激素-2受体的结构解析与药物作用位点研究 | 第25-46页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 细胞、质粒和感受态 | 第25-26页 |
| 2.2.3 仪器与耗材 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.3.1 常规试剂的配制和实验操作 | 第26-27页 |
| 2.3.2 PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.3.3 DNA片段重组 | 第28-29页 |
| 2.3.4 限制酶切反应 | 第29页 |
| 2.3.5 T4连接酶反应 | 第29-30页 |
| 2.3.6 Dpn1酶切反应 | 第30页 |
| 2.3.7 质粒小抽 | 第30-31页 |
| 2.3.8 质粒大抽 | 第31页 |
| 2.3.9 DNA胶回收 | 第31-32页 |
| 2.3.10 Bacmid的制备与抽提 | 第32-34页 |
| 2.3.11 Nb35的表达与纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.12 40 mL配体-PTH2R-Gs复合物的纯化 | 第35-37页 |
| 2.3.13 300 mL配体-PTH2R-Gs复合物的纯化（用MBP beads纯化） | 第37页 |
| 2.4 实验结果 | 第37-44页 |
| 2.4.1 PTH2R与PTH1R、GLP1R和CTR序列比对 | 第38页 |
| 2.4.2 PTH2R质粒的构建 | 第38-39页 |
| 2.4.3 PTH2R（25-550/457）MBP标签和GFP标签40 mL蛋白小量纯化 | 第39页 |
| 2.4.4 不同配体和是否加RAMP3的筛选 | 第39-40页 |
| 2.4.6 受体C端截短优化 | 第40-42页 |
| 2.4.7 V435和C443 300 mL纯化 | 第42-43页 |
| 2.4.8 W突变稳定复合物 | 第43-44页 |
| 2.5 总结与讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 甲状旁腺激素-1受体的结构解析与药物作用位点研究 | 第46-55页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.3.1 Fab-G50的表达与纯化 | 第46-47页 |
| 3.3.2 Nb35的表达与纯化 | 第47页 |
| 3.3.3 昆虫细胞表达PTH1R受体与Gs蛋白复合物 | 第47-48页 |
| 3.3.4 LA-PTH-PTH1R-Gs蛋白三聚体复合物的纯化 | 第48页 |
| 3.3.5 cAMP积累实验 | 第48-50页 |
| 3.4 实验结果 | 第50-54页 |
| 3.4.1 Nb35的表达与纯化 | 第50-51页 |
| 3.4.2 Fab-G50的表达与纯化 | 第51页 |
| 3.4.3 PTH1R-Gs/Fab-G50/Nb35蛋白复合物的纯化 | 第51-52页 |
| 3.4.4 PTH1R-Gs/Nb35蛋白复合物的纯化 | 第52-54页 |
| 3.5 总结与讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 基于MRS的个性化抗癌先导化合物的研究 | 第55-84页 |
| 4.1 引言 | 第55-57页 |
| 4.1.1 抗肿瘤药物与甲硫氨酰t-RNA合成酶概况 | 第55页 |
| 4.1.2 甲硫氨酰t-RNA合成酶与肿瘤的关系 | 第55-56页 |
| 4.1.3 开发MRS抑制剂的必要性 | 第56-57页 |
| 4.2 实验材料 | 第57页 |
| 4.2.1 实验所用细胞和质粒 | 第57页 |
| 4.2.2 实验所用试剂 | 第57页 |
| 4.2.3 实验所用仪器和耗材 | 第57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-64页 |
| 4.3.1 Nano-BiT基本原理 | 第57-58页 |
| 4.3.2 化合物筛选实验流程 | 第58-59页 |
| 4.3.3 化合物的稀释与排版 | 第59-62页 |
| 4.3.4 CCK8检测化合物细胞毒性 | 第62页 |
| 4.3.5 Cell Titer-Glo检测细胞毒性 | 第62-63页 |
| 4.3.6 Brdu细胞增殖实验 | 第63-64页 |
| 4.3.7 流式细胞术检测细胞周期 | 第64页 |
| 4.4 实验结果 | 第64-82页 |
| 4.4.1 筛选模型的建立与优化 | 第64-65页 |
| 4.4.2 96000个化合物的初筛 | 第65-66页 |
| 4.4.3 复筛 | 第66-69页 |
| 4.4.4 特异性和毒性实验 | 第69-81页 |
| 4.4.5 细胞增殖实验 | 第81-82页 |
| 4.4.6 流式细胞术检测细胞增殖 | 第82页 |
| 4.5 总结与讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 附录 | 第94-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第102页 |
