| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第12-14页 |
| 绪论 | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述干扰素的概述 | 第15-35页 |
| 1 干扰素的发现及生物进化 | 第15页 |
| 2 干扰素的分类和理化特性 | 第15-16页 |
| 2.1 干扰素的分类 | 第15-16页 |
| 2.2 干扰素的理化特性 | 第16页 |
| 3 干扰素的生成机理 | 第16-17页 |
| 3.1 干扰素的产生条件 | 第16-17页 |
| 3.2 产生干扰素的信号传导途径 | 第17页 |
| 4 干扰素的信号传导通路 | 第17-18页 |
| 4.1 干扰素的受体 | 第17-18页 |
| 4.2 干扰素的信号传递途径 | 第18页 |
| 5 干扰素的生物学活性与功能 | 第18-22页 |
| 5.1 干扰素的抗病毒作用 | 第19-20页 |
| 5.2 干扰素的抗肿瘤和抗增殖活性 | 第20-21页 |
| 5.3 干扰素的免疫调节作用 | 第21页 |
| 5.4 干扰素的其他作用 | 第21-22页 |
| 6 基因工程干扰素的改造 | 第22-24页 |
| 6.1 干扰素表达系统的种类及特点 | 第22页 |
| 6.2 对干扰素基因序列的改造 | 第22-23页 |
| 6.3 干扰素表达载体的改造 | 第23页 |
| 6.4 对干扰素生产工艺的改进 | 第23-24页 |
| 7 干扰素生物活性检测方法 | 第24-26页 |
| 7.1 干扰素测定方法的选择 | 第24-25页 |
| 7.2 影响干扰素测定的主要因素 | 第25-26页 |
| 8 干扰素的研究进展与应用 | 第26-29页 |
| 8.1 基因工程干扰素的研究进展 | 第26页 |
| 8.2 重组犬干扰素的研究现状 | 第26-27页 |
| 8.3 重组犬干扰素α的研究现状 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-35页 |
| 第二篇 试验部分 | 第35-85页 |
| 第一章 犬干扰素α4在大肠杆菌中的表达及抗病毒活性分析 | 第35-55页 |
| 1 材料和方法 | 第36-45页 |
| 1.1 材料 | 第36-37页 |
| 1.2 目的基因的设计与合成 | 第37页 |
| 1.3 重组质粒pET28a-CaIFN-α4的构建 | 第37-40页 |
| 1.4 重组CaIFN-α4蛋白的原核表达和表达条件优化 | 第40-42页 |
| 1.5 包涵体的提取 | 第42页 |
| 1.6 重组蛋白变性和复性 | 第42页 |
| 1.7 重组CaIFN-α4蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 1.8 重组CaIFN-α4蛋白生物学活性的鉴定 | 第43-45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| 2.1 成熟CaIFN-α4基因的获得 | 第45页 |
| 2.2 阳性重组质粒pET28a-CaIFN-α4的构建 | 第45-46页 |
| 2.3 重组CaIFN-α4蛋白的原核表达及条件优化 | 第46-47页 |
| 2.4 包涵体的提取结果 | 第47-48页 |
| 2.5 重组CaIFN-α4蛋白的复性 | 第48页 |
| 2.6 重组CaIFN-α4蛋白的纯化 | 第48页 |
| 2.7 重组CaIFN-α4蛋白生物学活性的鉴定 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 第二章 犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达及抗病毒活性分析 | 第55-71页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| 1.1 主要实验材料 | 第56页 |
| 1.2 CaIFN-α4与GFP融合基因的构建 | 第56-57页 |
| 1.3 含CaIFN-α4-GFP基因的重组表达质粒的构建 | 第57页 |
| 1.4 含CaIFN-α4-GFP基因的重组慢病毒的获得 | 第57-58页 |
| 1.5 含CaIFN-α4-GFP基因的重组CHO细胞的构建 | 第58页 |
| 1.6 CaIFN-α4-GFP基因在重组CHO细胞中表达及鉴定 | 第58页 |
| 1.7 重组CHO细胞培养上清液中CaIFN-α4活性检测 | 第58-59页 |
| 1.8 表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞的稳定性 | 第59页 |
| 2 结果 | 第59-63页 |
| 2.1 CaIFN-α4与GFP融合基因的构建 | 第59-60页 |
| 2.2 含CaIFN-α4-GFP基因的重组表达质粒的构建 | 第60页 |
| 2.3 含CaIFN-α4-GFP基因的重组慢病毒的获得 | 第60-61页 |
| 2.4 含CaIFN-α4-GFP基因的重组CHO细胞的构建 | 第61-62页 |
| 2.5 CaIFN-α4-GFP基因在重组CHO细胞中表达及鉴定 | 第62页 |
| 2.6 重组CHO细胞培养上清液中CaIFN-α4活性检测 | 第62-63页 |
| 2.7 表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞的稳定性 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 第三章 犬干扰素α2在大肠杆菌中的表达及抗病毒活性分析 | 第71-85页 |
| 1 材料和方法 | 第72-76页 |
| 1.1 材料 | 第72页 |
| 1.2 CaIFN-α2日的基因的设计与合成 | 第72-73页 |
| 1.3 重组质粒pET28a-CaIFN-α2构建及转化 | 第73-74页 |
| 1.4 犬干扰素α2蛋白原核表达和表达条件优化 | 第74-75页 |
| 1.5 包涵体的提取 | 第75页 |
| 1.6 重组CaIFN-α2蛋白变性和复性 | 第75页 |
| 1.7 重组CalFN-α2蛋白的纯化 | 第75页 |
| 1.8 重组CaIFN-α2蛋白生物活性的鉴定 | 第75-76页 |
| 1.9 重组CaIFN-α4蛋白与CaIFN-α2蛋白生物活性的比较 | 第76页 |
| 2 结果 | 第76-79页 |
| 2.1 重组质粒pET28a-CaIFN-α2的构建 | 第76-77页 |
| 2.2 重组CaIFN-α2蛋白的原核表达 | 第77页 |
| 2.3 包涵体的提取结果 | 第77-78页 |
| 2.4 重组CaIFN-α2蛋白的复性 | 第78页 |
| 2.5 重组CaIFN-α2蛋白质的纯化 | 第78-79页 |
| 2.6 重组CaIFN-α2蛋白生物学活性的鉴定 | 第79页 |
| 2.7 重组CaIFN-α4蛋白与CaIFN-α2蛋白生物活性的比较 | 第79页 |
| 3 讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 结论 | 第85-87页 |
| 附录: 常用试剂的配制 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第93页 |
