雄激素处理前列腺癌细胞系最适mRNA和microRNA内参基因筛选
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| 一 前列腺癌 | 第9-10页 |
| 1 前列腺癌的现状 | 第9页 |
| 2 去势抵抗性前列腺癌(CRPC) | 第9-10页 |
| 二 实时定量PCR技术 | 第10-17页 |
| 1 实时定量PCR技术的概念 | 第10页 |
| 2 实时定量PCR技术的原理 | 第10-12页 |
| 4 实时定量PCR的定量方法 | 第12-13页 |
| 4.1 绝对定量法 | 第12-13页 |
| 4.2 相对定量法 | 第13页 |
| 5 实时定量PCR中内参基因的应用 | 第13-17页 |
| 5.1 理想的内参基因 | 第13-15页 |
| 5.2 内参基因稳定性的分析方法 | 第15-17页 |
| 第二章 几种前列腺癌细胞系最适内参基因的筛选 | 第17-58页 |
| 一 研究背景 | 第17-20页 |
| 1 前列腺癌组织和细胞中最适内参基因的筛选 | 第17-18页 |
| 2 研究目的 | 第18-20页 |
| 二 实验材料及方法 | 第20-37页 |
| 1 实验材料 | 第20-25页 |
| 1.1 候选内参基因 | 第20-22页 |
| 1.2 前列腺细胞 | 第22-23页 |
| 1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.4 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-37页 |
| 2.1 细胞培养条件 | 第25-26页 |
| 2.2 细胞传代 | 第26页 |
| 2.3 雄性激素处理 | 第26-27页 |
| 2.4 Total RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.5 cDNA合成 | 第28页 |
| 2.6 实时定量PCR | 第28-32页 |
| 2.7 PCR产物回收 | 第32页 |
| 2.8 克隆 | 第32-34页 |
| 2.9 质粒提取 | 第34页 |
| 2.10 测序 | 第34-36页 |
| 2.11 数据分析 | 第36-37页 |
| 三 实验结果 | 第37-56页 |
| 1 RNA样品质量和完整度 | 第37-39页 |
| 2 引物特异性检测和qPCR条件优化 | 第39-41页 |
| 3 PSA蛋白验证DHT处理有效性 | 第41-42页 |
| 4 候选内参基因的表达谱 | 第42-44页 |
| 5 最适内参基因的鉴定 | 第44-51页 |
| 5.1 geNorm算法分析 | 第44-47页 |
| 5.2 NormFinder算法分析 | 第47页 |
| 5.3 BestKeeper算法分析 | 第47-51页 |
| 6 内参基因在AR+/-细胞中的稳定性 | 第51-53页 |
| 7 最适内参基因的验证 | 第53-56页 |
| 四 讨论 | 第56-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 在学期间获奖和发表论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
