| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-23页 |
| ·烟酰胺辅酶再生研究进展 | 第10-15页 |
| ·化学方法 | 第11页 |
| ·光化学方法 | 第11-12页 |
| ·电化学方法 | 第12页 |
| ·酶法 | 第12-15页 |
| ·亚磷酸脱氢酶研究现状 | 第15-18页 |
| ·亚磷酸脱氢酶的发现 | 第15-16页 |
| ·亚磷酸脱氢酶的理化性质 | 第16-17页 |
| ·亚磷酸脱氢酶的催化机理 | 第17-18页 |
| ·未知序列基因的克隆策略 | 第18-21页 |
| ·简并PCR | 第19页 |
| ·热不对称交错PCR(TAIL-PCR) | 第19-21页 |
| ·本研究的目的和策略 | 第21-23页 |
| ·研究目的 | 第21-22页 |
| ·研究策略 | 第22-23页 |
| 第2章 亚磷酸脱氢酶基因的克隆与重组质粒构建 | 第23-38页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第23页 |
| ·试剂盒和工具酶 | 第23-24页 |
| ·其他试剂 | 第24页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·Pseudomonas sp.M亚磷酸脱氢酶基因的克隆与测序 | 第25-29页 |
| ·构建重组质粒 | 第29-30页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-37页 |
| ·Pseudomonas sp.M亚磷酸脱氢酶基因部分序列的扩增 | 第31-33页 |
| ·TAIL-PCR扩增亚磷酸脱氢酶侧翼序列 | 第33页 |
| ·亚磷酸脱氢酶基因全序列扩增 | 第33-36页 |
| ·重组质粒pET-28a-phosM的构建 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第3章 亚磷酸脱氢酶基因的表达、纯化和酶性质的研究 | 第38-51页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·菌种和质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第39-40页 |
| ·主要仪器和设备 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·亚磷酸脱氢酶的诱导表达 | 第40页 |
| ·亲和层析纯化重组亚磷酸脱氢酶 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第41-42页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第42-43页 |
| ·重组亚磷酸脱氢酶性质的研究 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·亚磷酸脱氢酶的纯化结果 | 第44页 |
| ·重组酶的最适反应温度和热稳定性 | 第44-45页 |
| ·重组酶的最适反应pH及pH稳定性 | 第45-47页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| 第4章 结论和展望 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| ·后续研究展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
