| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 中文文摘 | 第6-12页 |
| 绪论 | 第12-23页 |
| 0.1 研究背景 | 第12-13页 |
| 0.2 文献综述 | 第13-21页 |
| 0.2.1 糖基转移酶 | 第14-21页 |
| 0.2.1.1 糖基转移酶的分类、结构 | 第15-17页 |
| 0.2.1.2 GT64糖基转移酶家族 | 第17-18页 |
| 0.2.1.3 糖基转移酶在植物抗病过程中的作用 | 第18-21页 |
| 0.2.2 展望 | 第21页 |
| 0.3 本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第一章 OsGT64A基因区、启动子区及转录本的克隆与序列比对分析 | 第23-42页 |
| 第一节 前言 | 第23页 |
| 第二节 实验材料与试剂 | 第23页 |
| 1.2.1 植物材料 | 第23页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第23页 |
| 第三节 实验方法 | 第23-31页 |
| 1.3.1 材料准备与引物设计 | 第24页 |
| 1.3.1.1 粳稻云引、丽江新团黑谷苗株的培养 | 第24页 |
| 1.3.1.2 水稻OsGT64A基因区与启动子区序列的搜索 | 第24页 |
| 1.3.1.3 设计引物 | 第24页 |
| 1.3.2 OsGT64A的基因序列与启动子序列的获得 | 第24-28页 |
| 1.3.2.1 粳稻云引、丽江新团黑谷叶片总DNA的提取 | 第24-25页 |
| 1.3.2.2 基因与启动子的扩增及胶回收 | 第25-27页 |
| 1.3.2.3 目的片段与克隆载体的连接 | 第27页 |
| 1.3.2.4 E.coli DH5 a感受态细胞的制备及转化 | 第27-28页 |
| 1.3.2.5 测序及拼接序列的获得 | 第28页 |
| 1.3.3 OsGT64A转录本的获得 | 第28-31页 |
| 1.3.3.1 云引及丽江新团黑谷叶片总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 1.3.3.2 RNA反转录-cDNA库的获得 | 第29-30页 |
| 1.3.3.3 可变剪接体的扩增与胶回收 | 第30-31页 |
| 1.3.3.4 连接克隆载体与测序 | 第31页 |
| 第四节 结果与分析 | 第31-41页 |
| 1.4.1 云引与丽江新团黑谷中OsGT64A基因CDS及蛋白质序列的比对 | 第31-34页 |
| 1.4.2 OsGT64A蛋白的功能、空间结构预测及进化树分析 | 第34-36页 |
| 1.4.3 云引与丽江新团黑谷中OsGT64A基因启动子区的序列比对 | 第36-38页 |
| 1.4.4 OsGT64A启动子功能元件预测及突变分析 | 第38页 |
| 1.4.5 OsGT64A转录本的分析 | 第38-41页 |
| 第五节 讨论 | 第41-42页 |
| 第二章 OsGT64A基因在逆境胁迫下的表达模式分析 | 第42-50页 |
| 第一节 前言 | 第42页 |
| 第二节 实验材料 | 第42页 |
| 2.2.1 材料 | 第42页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第42页 |
| 第三节 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.3.1 粳稻云引、丽江新团黑谷稻瘟病菌接种 | 第42-43页 |
| 2.3.1.1 水稻幼苗的培养与材料准备 | 第42-43页 |
| 2.3.1.2 培养稻瘟病菌及制备孢子悬浮液 | 第43页 |
| 2.3.1.3 人工接种稻瘟病菌与取样 | 第43页 |
| 2.3.2 粳稻云引的水杨酸喷雾处理 | 第43-44页 |
| 2.3.2.1 三叶期水稻幼苗的喷雾处理 | 第43-44页 |
| 2.3.3 OsGT64A基因受稻瘟病侵染、水杨酸处理时的表达变化情况 | 第44-45页 |
| 2.3.3.1 荧光定量PCR引物的设计 | 第44页 |
| 2.3.3.2 叶片总RNA的提取与cDNA的获得 | 第44页 |
| 2.3.3.3 实时荧光定量PCR反应 | 第44-45页 |
| 第四节 结果与分析 | 第45-48页 |
| 2.4.1 稻瘟病菌的培养 | 第45-46页 |
| 2.4.2 稻瘟病菌“四川-43”的接种 | 第46页 |
| 2.4.3 OsGT64A基因在稻瘟病胁迫下的表达变化分析 | 第46-48页 |
| 2.4.4 OsGT64A基因在水杨酸处理下的表达变化分析 | 第48页 |
| 第五节 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 OsGT64A基因相关表达载体构建及遗传转化 | 第50-88页 |
| 第一节 前言 | 第50-51页 |
| 第二节 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第51页 |
| 3.2.2 植物材料 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第52页 |
| 第三节 实验方法 | 第52-68页 |
| 3.3.1 OsGT64A基因植物亚细胞定位载体的构建 | 第52-56页 |
| 3.3.1.1 云引OsGT64A编码区酶切位点分析及载体酶切位点的确定 | 第52页 |
| 3.3.1.2 带酶切位点CDS片段的扩增 | 第52-53页 |
| 3.3.1.3 带酶切位点CDS片段与载体的双酶切 | 第53-54页 |
| 3.3.1.4 目的片段与载体片段的连接 | 第54页 |
| 3.3.1.5 重组质粒的转化与鉴定 | 第54页 |
| 3.3.1.6 重组质粒的提取 | 第54-55页 |
| 3.3.1.7 重组质粒转化农杆菌 | 第55-56页 |
| 3.3.2 植物亚细胞定位载体瞬时转染烟草 | 第56-57页 |
| 3.3.3 OsGT64A基因过量表达载体的构建 | 第57-59页 |
| 3.3.3.1 扩增带有同源末端片段的CDS区 | 第57-58页 |
| 3.3.3.2 质粒载体的双酶切与同源重组反应 | 第58-59页 |
| 3.3.4 OsGT64A基因CRISPR-Cas9敲除表达载体的构建 | 第59-62页 |
| 3.3.4.1 gRNA靶点的筛选 | 第59-60页 |
| 3.3.4.2 包含靶点序列的连接片段扩增 | 第60页 |
| 3.3.4.3 “GoldenGate”克隆法构建酶切-连接反应体系 | 第60-61页 |
| 3.3.4.4 转化大肠杆菌及克隆验证 | 第61-62页 |
| 3.3.5 OsGT64A RNAi干扰载体的构建 | 第62-64页 |
| 3.3.5.1 干扰片段的筛选 | 第62页 |
| 3.3.5.2 目的片段同源序列的引入 | 第62-63页 |
| 3.3.5.3 ptck303载体的双酶切 | 第63-64页 |
| 3.3.5.4 -步法进行多片段同源重组连接 | 第64页 |
| 3.3.6 OsGT64A Gus染色表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 3.3.6.1 启动子序列同源末端的引入 | 第64页 |
| 3.3.6.2 1305载体的双酶切及同源重组反应 | 第64-65页 |
| 3.3.7 农杆菌介导以的遗传转化 | 第65-68页 |
| 3.3.7.1 水稻愈伤组织的诱导与继代培养 | 第65页 |
| 3.3.7.2 农杆菌转化及植物组织培养 | 第65-67页 |
| 3.3.7.3 转基因苗的检测 | 第67-68页 |
| 3.3.7.4 CRISPR-Cas9基因敲除突变的检测 | 第68页 |
| 第四节 结果与分析 | 第68-87页 |
| 3.4.1 植物亚细胞定位载体pCAMBIA1302-OsGT64A的构建 | 第68-71页 |
| 3.4.2 OsGT64A亚细胞定位瞬时转化烟草 | 第71页 |
| 3.4.3 OsGT64A过量表达载体构建 | 第71-74页 |
| 3.4.4 植物基因敲除载体pHUE411-OsGT64A的构建 | 第74-77页 |
| 3.4.5 植物RNA干扰载体ptck303-OsGT64A的构建 | 第77-80页 |
| 3.4.6 植物gus表达载体1305-OsGT64A-promoter的构建 | 第80-82页 |
| 3.4.7 农杆菌介导粳稻云引的遗传转化 | 第82-87页 |
| 3.4.7.1 转基因苗的检测 | 第83-85页 |
| 3.4.7.2 CRISPR-Cas9基因敲除突变的分析 | 第85-87页 |
| 第五节 讨论 | 第87-88页 |
| 第四章 结论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 个人简历 | 第99-101页 |
