| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 病毒编码的RNA沉默抑制子研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 RNA沉默 | 第13-14页 |
| 1.1.2 RNA沉默抑制子及其作用机制 | 第14-15页 |
| 1.1.3 RNA沉默抑制子的鉴定方法 | 第15-16页 |
| 1.1.4 马铃薯卷叶病毒属编码的RNA沉默抑制子作用机理 | 第16-18页 |
| 1.2 甘蔗黄叶病毒研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2.1 甘蔗黄叶病毒生物学特性 | 第18页 |
| 1.2.2 甘蔗黄叶病毒基因组结构和功能 | 第18-19页 |
| 1.2.3 甘蔗黄叶病毒遗传多样性 | 第19页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 SCYLV遗传进化及遗传多样性研究 | 第21-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验材料和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-35页 |
| 2.2.1 RT-PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.2.2 基于SCYLVP0序列的系统进化分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3 基于SCYLV基因组序列的系统进化分析 | 第26-27页 |
| 2.2.4 SCYLV基因组及其编码的基因序列一致性分析 | 第27-31页 |
| 2.2.5 甘蔗黄叶病毒基因组的重组分析 | 第31-34页 |
| 2.2.6 我国主要蔗区SCYLV基因型分布 | 第34-35页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 SCYLV编码的P0蛋白功能结构域及亚细胞定位研究 | 第37-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37-42页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 质粒和菌株 | 第37-38页 |
| 3.1.3 P0基因克隆 | 第38页 |
| 3.1.4 P0蛋白特性分析 | 第38-39页 |
| 3.1.5 P0选择压力分析 | 第39页 |
| 3.1.6 P0及其突变体植物表达载体构建 | 第39-41页 |
| 3.1.7 外植体准备与基因枪轰击 | 第41-42页 |
| 3.1.8 EYFP瞬时表达分析 | 第42页 |
| 3.1.9 GFP-P0荧光瞬时表达观察 | 第42页 |
| 3.2 结果 | 第42-47页 |
| 3.2.1 P0蛋白理化性质 | 第42-43页 |
| 3.2.2 P0蛋白结构特征 | 第43页 |
| 3.2.3 P0选择压力分析 | 第43-44页 |
| 3.2.4 P0及其缺失突变体沉默抑制子功能鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.5 P0在洋葱表皮细胞中的定位 | 第46-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 不同SCYLV基因型P0蛋白活性差异分析 | 第50-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-54页 |
| 4.1.1 植物材料和培养条件 | 第50页 |
| 4.1.2 质粒和菌株 | 第50-51页 |
| 4.1.3 含不同SCYLV基因型P0的pUbi-NOS表达载体构建 | 第51页 |
| 4.1.4 含不同SCYLV基因型P0的pGD表达载体构建 | 第51-52页 |
| 4.1.5 甘蔗嫩叶组织制备和基因枪轰击 | 第52页 |
| 4.1.6 EYFP基因瞬时表达定量分析 | 第52页 |
| 4.1.7 农杆菌感受态的制备 | 第52页 |
| 4.1.8 冻融法转化农杆菌 | 第52页 |
| 4.1.9 农杆菌注射本生烟 | 第52-53页 |
| 4.1.10 GFP荧光观察和拍照 | 第53页 |
| 4.1.11 实时荧光定量RT-PCR分析 | 第53-54页 |
| 4.2 结果与分析 | 第54-60页 |
| 4.2.1 不同SCYLV基因型P0植物表达载体 | 第54页 |
| 4.2.2 不同SCYLV基因型P0在甘蔗抑制RNA沉默的表达活性差异 | 第54-57页 |
| 4.2.3 不同SCYLV基因型P0在本生烟上抑制RNA沉默的活性差异 | 第57-58页 |
| 4.2.4 从mRNA水平上分析GFP和P0转基因瞬时表达差异 | 第58-60页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 SCYLV编码的P0与AGOs互作 | 第62-70页 |
| 5.1 材料与方法 | 第63-66页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第63页 |
| 5.1.2 质粒和菌株 | 第63页 |
| 5.1.3 载体构建 | 第63-64页 |
| 5.1.4 酵母双杂交 | 第64-65页 |
| 5.1.5 农杆菌共浸润接种 | 第65-66页 |
| 5.1.6 激光共聚焦显微镜观察及拍照 | 第66页 |
| 5.2 结果与分析 | 第66-68页 |
| 5.2.1 酵母双杂交分析P0蛋白与拟南芥AGOs蛋白互作 | 第66-67页 |
| 5.2.2 BIFC分析P0蛋白与拟南芥AGOs蛋白互作 | 第67-68页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 6.1 结论 | 第70-71页 |
| 6.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
