| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 杆状病毒 | 第15-20页 |
| 1.1.1 杆状病毒简介 | 第15页 |
| 1.1.2 杆状病毒的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.3 杆状病毒的生活周期 | 第16-17页 |
| 1.1.4 杆状病毒的应用 | 第17-20页 |
| 1.2 杆状病毒囊膜蛋白 | 第20-25页 |
| 1.2.1 GP64囊膜蛋白的结构与功能 | 第20-22页 |
| 1.2.2 GP64囊膜蛋白表面功能域 | 第22-23页 |
| 1.2.3 与囊膜蛋白GP64作用的宿主细胞表面受体 | 第23-24页 |
| 1.2.4 GP64囊膜蛋白介导BV进入宿主细胞方式 | 第24-25页 |
| 1.3 BmNPVGP64囊膜蛋白研究现状 | 第25-26页 |
| 1.4 目的与意义 | 第26-27页 |
| 第2章 BmNPV gp64缺失病毒的构建 | 第27-39页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验室常用试剂配制 | 第28-30页 |
| 2.1.3 实验室仪器和设备 | 第30页 |
| 2.2 实验步骤 | 第30-35页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 2.2.2 Chl基因的酶切 | 第31-32页 |
| 2.2.3 Chl基因的琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.4 Chl基因的回收 | 第32-33页 |
| 2.2.5 Nanodrop测Chl基因浓度 | 第33页 |
| 2.2.6 打靶分子的PCR扩增 | 第33页 |
| 2.2.7 打靶分子的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.8 BmBacJS13 gp64序列的缺失 | 第34页 |
| 2.2.9 电转 | 第34页 |
| 2.2.10 BmNPV gp64缺失Bacmids筛选 | 第34-35页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.3.1 Chl基因的酶切 | 第35-36页 |
| 2.3.2 打靶分子PCR扩增 | 第36页 |
| 2.3.3 BmNPV gp64缺失Bacmids的鉴定 | 第36-39页 |
| 第3章 BmNPV gp64胆固醇识别位点活性及GP64蛋白定位研究 | 第39-69页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第39-42页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 实验室常用试剂配制 | 第39-42页 |
| 3.2 实验步骤 | 第42-56页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第42-44页 |
| 3.2.2 点突变gp64基因的PCR | 第44-45页 |
| 3.2.3 点突变gp64基因分段的胶回收 | 第45页 |
| 3.2.4 点突变gp64基因全长的获得 | 第45-46页 |
| 3.2.5 点突变gp64基因与pFastBacDual-P_(p10)-eGFP载体的酶切 | 第46-47页 |
| 3.2.6 pFastBacDual-P_(p10)-eGFP与点突变gp64基因的连接 | 第47页 |
| 3.2.7 感受态的制备 | 第47页 |
| 3.2.8 点突变pFastBacDual-P_(p10)-eGFP-P_(PH)-gp64的转化 | 第47-48页 |
| 3.2.9 pFastBacDual-P_(p10)-eGFP-P_(PH)-gp64质粒的提取 | 第48页 |
| 3.2.10 点突变pFastBacDual-P_(p10)-eGFP-P_(PH)-gp64质粒酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.11 点突变pFastBacDual-P_(p10)-eGFP-P_(PH)-gp64的测序 | 第49页 |
| 3.2.12 携带BmBacJS13Δgp64的感受态的制备 | 第49页 |
| 3.2.13 点突变pFastBacDual-P_(p10)-eGFP-P_(PH)-gp64的转座 | 第49页 |
| 3.2.14 点突变重组Bacmids的菌液鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.15 碱式裂解法抽提重组Bacmids | 第50页 |
| 3.2.16 重组Bacmids的转染 | 第50-51页 |
| 3.2.17 重组Bacmids转染细胞的Western-Blot | 第51-52页 |
| 3.2.18 点突变BmNPV gp64病毒粒子的纯化及解膜 | 第52页 |
| 3.2.19 病毒粒子GP64蛋白的Western-Blot | 第52页 |
| 3.2.20 病毒生长曲线的绘制 | 第52-53页 |
| 3.2.21 生物测定 | 第53页 |
| 3.2.22 构建点突变瞬时转染质粒 | 第53-55页 |
| 3.2.23 pIZ/V5-gp64质粒与点突变重组Bacmids共转染 | 第55页 |
| 3.2.24 点突变pIZ/V5重组质粒的转染 | 第55页 |
| 3.2.25 免疫荧光 | 第55-56页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第56-67页 |
| 3.3.1 点突变gp64基因分段PCR | 第56页 |
| 3.3.2 点突变gp64全长PCR | 第56-57页 |
| 3.3.3 点突变gp64基因与pFastBacDual-P_(p10)-eGFP载体的酶切 | 第57-58页 |
| 3.3.4 点突变pFastBacDual-P_(p10)-eGFP-P_(PH)-gp64质粒的酶切鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3.5 重组Bacmids菌液PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.6 重组Bacmids转染结果 | 第60页 |
| 3.3.7 重组Bacmids转染细胞的Western-Blot | 第60-61页 |
| 3.3.8 病毒膜蛋白的Western-Blot | 第61-62页 |
| 3.3.9 点突变病毒生长曲线的绘制 | 第62页 |
| 3.3.10 生物测定 | 第62-63页 |
| 3.3.11 点突变瞬时转染载体的构建 | 第63-65页 |
| 3.3.12 野生型pIZ/V5-gp64重组质粒与点突变重组Bacmids共转染 | 第65-66页 |
| 3.3.13 免疫荧光 | 第66-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录 | 第75-79页 |
| 附录1 pFastBacDual载体图谱 | 第75-76页 |
| 附录2 pIZ/V5-His载体图谱 | 第76-77页 |
| 附录3 SDS-PAGE分离胶配方表 | 第77-78页 |
| 附录4 SDS-PAGE浓缩胶(5%Acrylamide)配方表 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
