| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 鸡毒支原体简介 | 第12页 |
| 1.2 鸡毒支原体的危害及防治 | 第12-13页 |
| 1.3 miRNA基本特征 | 第13页 |
| 1.4 miRNA在疾病中的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 miRNA-16在疾病中的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.6 PIK3R1研究进展 | 第16-17页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 实验材料和方法 | 第18-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 主要试剂及溶液的配制 | 第18-20页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.3 生物信息学分析相关软件及数据库 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-41页 |
| 2.2.1 靶基因的预测与分析 | 第21-22页 |
| 2.2.2 PIK3R13’UTR双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第22-28页 |
| 2.2.3 双荧光素酶报告基因的检测 | 第28-30页 |
| 2.2.4 超表达gga-miR-16-5pDF-1细胞中PIK3R1表达分析 | 第30-35页 |
| 2.2.5 抑制gga-miR-16-5pDF-1细胞中PIK3R1表达分析 | 第35-36页 |
| 2.2.6 gga-miR-16-5p及PIK3R1在不同时期MG-HS感染SPF鸡胚肺组织中的表达分析 | 第36-39页 |
| 2.2.7 gga-miR-16-5p及PIK3R1在MG-HS感染的DF-1细胞中的表达分析 | 第39页 |
| 2.2.8 超表达gga-miR-16-5p的DF-1细胞中AKT及P-AKT蛋白表达分析 | 第39页 |
| 2.2.9 抑制gga-miR-16-5p的DF-1细胞中AKT及P-AKT蛋白表达分析 | 第39页 |
| 2.2.10 gga-miR-16-5p对细胞增殖及细胞周期的影响 | 第39-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-61页 |
| 3.1 gga-miR-16-5p在鸡胚肺组织中的相对表达量 | 第41-42页 |
| 3.1.1 肺组织cDNA中内参基因5s-rRNA的检测 | 第41页 |
| 3.1.2 gga-miR-16-5p的扩增及检测 | 第41-42页 |
| 3.1.3 gga-miR-16-5p在不同日龄鸡胚肺组织中的相对表达量 | 第42页 |
| 3.2 qPCR检测DF-1细胞中gga-miR-16-5p的相对表达量 | 第42-43页 |
| 3.3 预测及分析gga-miR-16-5p靶基因 | 第43-45页 |
| 3.4 PIK3R13’UTR双荧光素酶报告基因载体 | 第45-48页 |
| 3.4.1 PIK3R13’UTR序列的扩增温度的优化 | 第45-46页 |
| 3.4.2 psiCHECKTM-2-PIK3R13’UTR及突变重组质粒的酶切鉴定 | 第46页 |
| 3.4.3 psiCHECKTM-2-PIK3R13’UTR及突变重组质粒的测序 | 第46-48页 |
| 3.5 PIK3R13’UTR双荧光素酶报告基因的分析 | 第48页 |
| 3.6 qPCR检测鸡胚肺组织中PIK3R1的相对表达量 | 第48-49页 |
| 3.7 qPCR检测DF-1细胞中PIK3R1的相对表达量 | 第49-50页 |
| 3.8 过表达gga-miR-16-5p后PIK3R1及AKT的相对表达量 | 第50-52页 |
| 3.9 细胞转染gga-miR-16-5p抑制剂后PIK3R1及AKT的相对表达量 | 第52-55页 |
| 3.10 细胞中超表达gga-miR-16-5p对NF-κB、TNF-α表达量的影响 | 第55-56页 |
| 3.11 细胞增殖、周期、凋亡检测 | 第56-61页 |
| 3.11.1 CCK-8检测细胞增殖 | 第56-57页 |
| 3.11.2 细胞周期检测 | 第57-59页 |
| 3.11.3 细胞凋亡检测 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 5 小结 | 第64-65页 |
| 5.1 本研究取得的成果 | 第64页 |
| 5.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
