摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
前言 | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-20页 |
1.1 植物逆境生理研究进展 | 第15-16页 |
1.1.1 干旱胁迫对植物的影响 | 第15页 |
1.1.2 盐胁迫对植物的影响 | 第15-16页 |
1.1.3 高温胁迫对植物的影响 | 第16页 |
1.2 植物SOD基因的研究进展 | 第16-18页 |
1.2.1 植物SOD基因抗逆性研究进展 | 第16-17页 |
1.2.2 SOD基因家族同源性特征研究进展 | 第17页 |
1.2.3 植物SOD基因的分子克隆研究进展。 | 第17页 |
1.2.4 SOD基因表达调控研究进展 | 第17-18页 |
1.2.5 SOD酶活性的研究进展 | 第18页 |
1.3 竹类抗逆研究进展 | 第18-20页 |
第二章 毛竹SOD基因家族生物信息学分析 | 第20-33页 |
2.1 实验材料 | 第20页 |
2.2 实验方法 | 第20-21页 |
2.2.1 毛竹数据库建立 | 第20页 |
2.2.2 毛竹SOD核酸与蛋白序列获取 | 第20页 |
2.2.3 毛竹SOD蛋白家族理化性质分析 | 第20-21页 |
2.2.4 毛竹SOD基因家族基因结构分析 | 第21页 |
2.2.5 毛竹与模式植物SOD家族蛋白聚类分析 | 第21页 |
2.3 结果与分析 | 第21-31页 |
2.3.1 毛竹SOD家族蛋白理化性质分析 | 第21-22页 |
2.3.3 毛竹SOD蛋白家族的跨膜结构信号肽分析 | 第22-24页 |
2.3.4 亚细胞定位的预测分析 | 第24-25页 |
2.3.5 毛竹SOD蛋白家族磷酸化位点预测分析 | 第25-26页 |
2.3.6 毛竹SOD家族基因在基因组序列中及结构分析 | 第26-27页 |
2.3.7 毛竹与模式植物SOD基因家族聚类结构分析 | 第27-31页 |
2.4 结论与讨论 | 第31-33页 |
2.4.1 毛竹SOD家族蛋白磷酸化调控机制 | 第31页 |
2.4.2 毛竹SOD家族蛋白亚细胞定位预测分析 | 第31-33页 |
第三章 毛竹SOD基因家族进化分析 | 第33-42页 |
3.1 实验材料 | 第33页 |
3.2 实验方法 | 第33-34页 |
3.2.1 Ka/Ks(dN/dS)值计算与复制事件/分化事件计算 | 第33页 |
3.2.2 毛竹SOD基因家族进化过程中选择压力与复制事件分析 | 第33页 |
3.2.3 毛竹SOD基因家族与绿竹进化过程中选择压力与复制事件分析 | 第33-34页 |
3.2.4 毛竹SOD基因家族与绿竹进化过程中选择压力与复制事件 | 第34页 |
3.3 结果与分析 | 第34-39页 |
3.3.1 毛竹SOD基因家族进化过程中选择压力与复制事件分析 | 第34-36页 |
3.3.2 毛竹SOD基因家族与绿竹进化过程中选择压力与复制事件分析 | 第36-37页 |
3.3.3 毛竹SOD基因家族与水稻进化过程中选择压力与分化事件分析 | 第37-39页 |
3.4 结果与讨论 | 第39-42页 |
3.4.1 毛竹SOD基因家族进化过程中选择压力分析 | 第39-40页 |
3.4.2 毛竹SOD基因家族进化过程中复制事件分析 | 第40-42页 |
第四章 毛竹SOD基因启动子相关分析 | 第42-51页 |
4.0 实验材料 | 第42页 |
4.1 实验方法 | 第42页 |
4.2 结果与分析 | 第42-50页 |
4.2.1 毛竹SOD基因家族启动子区与转录起始位点预测分析 | 第42-44页 |
4.2.2 PeSOD基因家族启动子中顺式元件预测分析 | 第44-50页 |
4.2.2.1 毛竹SOD基因家族成员启动子核心元件预测与分析 | 第44页 |
4.2.2.2 毛竹SOD基因家族成员启动子光反应元件的预测分析 | 第44页 |
4.2.2.3 毛竹SOD基因家族成员启动子激素应答元件的预测分析 | 第44-45页 |
4.2.2.4 毛竹SOD基因家族成员启动子胁迫响应元件的预测分析 | 第45-50页 |
4.3 结果与讨论 | 第50-51页 |
第五章 PeCZSOD1基因启动子克隆与功能分析 | 第51-65页 |
5.1 实验材料 | 第51页 |
5.2 实验方法 | 第51-62页 |
5.2.1 毛竹总DNA提取 | 第51页 |
5.2.2 PeCZSOD1基因启动子克隆与分析 | 第51-53页 |
5.2.3 启动子片段载体构建与大肠杆菌转化 | 第53-56页 |
5.2.3.1 启动子目的条带扩增 | 第53页 |
5.2.3.2 目的条带割胶回收 | 第53-54页 |
5.2.3.3 pBI101载体的双酶切 | 第54页 |
5.2.3.4 大肠杆菌感受态制备 | 第54-55页 |
5.2.3.5 PeCZSOD1启动子表达载体的构建 | 第55页 |
5.2.3.6 连接产物的大肠杆菌转化 | 第55-56页 |
5.2.3.7 单菌落检测 | 第56页 |
5.2.4 转化农杆菌 | 第56-57页 |
5.2.4.1 质粒提取 | 第56页 |
5.2.4.2 农杆菌(Gv3101、C58C1)感受态制备 | 第56-57页 |
5.2.4.3 农杆菌电击转化 | 第57页 |
5.2.5 突变体拟南芥种植 | 第57页 |
5.2.6 农杆菌侵染拟南芥幼苗 | 第57-59页 |
5.2.7 拟南芥GUS组织化学染色 | 第59-60页 |
5.2.8 荧光法测定GUS酶活性 | 第60页 |
5.2.9 GUS蛋白的提取 | 第60-61页 |
5.2.10 拟南芥瞬时表达GUS蛋白含量测定 | 第61-62页 |
5.2.10.1 制作标准曲线 | 第61页 |
5.2.10.2 GUS定量检测 | 第61-62页 |
5.2.10.3 拟南芥瞬时表达GUS酶活计算 | 第62页 |
5.3 结果与分析 | 第62-64页 |
5.3.1 启动子瞬时表达活性 | 第62-63页 |
5.3.2 启动子瞬时表达GUS酶活性 | 第63-64页 |
5.4 结论与讨论 | 第64-65页 |
第六章 毛竹SOD家族基因表达模式及SOD酶活性 | 第65-78页 |
6.1 实验材料 | 第65页 |
6.2 实验方法 | 第65-67页 |
6.2.1 毛竹SOD家族基因表达模式 | 第65-66页 |
6.2.1.1 荧光定量PCR引物设计 | 第65页 |
6.2.1.2 毛竹实生苗种植 | 第65页 |
6.2.1.3 毛竹实生苗不同组织部位取样 | 第65页 |
6.2.1.4 毛竹实生苗胁迫处理 | 第65页 |
6.2.1.5 毛竹样本RNA提取 | 第65-66页 |
6.2.1.6 RNA反转录 | 第66页 |
6.2.2 毛竹SOD酶活性测定 | 第66-67页 |
6.2.2.1 样本处理与采集 | 第66-67页 |
6.2.2.2 SOD粗酶液提取 | 第67页 |
6.2.2.3 SOD酶活测定 | 第67页 |
6.2.2.4 总SOD活力计算 | 第67页 |
6.3 结果与分析 | 第67-75页 |
6.3.1 定量引物设计 | 第67-68页 |
6.3.2 PeSOD基因家族各成员在毛竹不同组织部位的表达分析 | 第68-69页 |
6.3.3 PeSOD基因家族各成员在非生物胁迫中的表达分析 | 第69-72页 |
6.3.3.1 PeSOD基因家族在盐胁迫环境下的表达模式 | 第69-70页 |
6.3.3.2 PeSOD基因家族在高温胁迫环境下的表达模式 | 第70-71页 |
6.3.3.3 PeSOD基因家族在干旱胁迫环境下的表达模式 | 第71-72页 |
6.3.4 PeSOD基因家族各成员在激素处理条件下的表达分析 | 第72-74页 |
6.3.4.1 PeSOD基因家族在ABA激素处理下的表达模式 | 第72-73页 |
6.3.4.2 PeSOD基因家族在GA激素处理下的表达模式 | 第73-74页 |
6.3.4.3 PeSOD基因家族在MeJA激素处理下的表达模式 | 第74页 |
6.3.5 非生物胁迫与激素处理条件下毛竹SOD酶活性分析 | 第74-75页 |
6.4 结论与讨论 | 第75-78页 |
第七章 毛竹SOD基因功能研究 | 第78-84页 |
7.1 实验材料 | 第78页 |
7.2 实验方法 | 第78-81页 |
7.2.1 引物设计与毛竹SOD基因克隆 | 第78-81页 |
7.2.1.1 引物设计 | 第78页 |
7.2.1.2 目的条带扩增 | 第78-79页 |
7.2.1.3 35S::PeCZSOD1双元表达载体构建 | 第79-80页 |
7.2.1.4 农杆菌转化 | 第80页 |
7.2.1.5 野生型拟南芥种植 | 第80页 |
7.2.1.6 农杆菌侵染拟南芥 | 第80-81页 |
7.2.1.7 转基因拟南芥种子筛选 | 第81页 |
7.3 结果与分析 | 第81-83页 |
7.3.1 T1代转基因拟南芥琼脂糖凝胶电泳检测 | 第81页 |
7.3.2 转基因拟南芥抗逆性 | 第81-83页 |
7.4 结论与讨论 | 第83-84页 |
第八章 结论与展望 | 第84-86页 |
8.1 研究结论 | 第84-85页 |
8.2 研究展望 | 第85-86页 |
参考文献 | 第86-91页 |
附录 | 第91-92页 |
致谢 | 第92页 |