| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 常用克隆策略及特点 | 第9-10页 |
| 1.2 TA克隆 | 第10页 |
| 1.3 T载体的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.3.1 T载体的类别 | 第10页 |
| 1.3.2 T载体制备的常用方法 | 第10-13页 |
| 1.3.3 常规T载体改进的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.4 大肠杆菌pHsh系列表达载体 | 第15-16页 |
| 1.5 基因组文库的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.5.1 基因组DNA的分离及处理 | 第16-17页 |
| 1.5.2 用于基因组文库构建的常用载体 | 第17-18页 |
| 1.5.3 文库常用的筛选方法 | 第18-19页 |
| 1.6 立题意义及研究内容 | 第19-21页 |
| 1.6.1 立题意义 | 第19页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 pHsh-T载体的构建 | 第21-37页 |
| 2.1 材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要化学试剂及酶 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验室常用试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 培养基及培养基的配制 | 第24页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.6 DNA引物合成和DNA测序服务 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 一般分子生物学基本操作 | 第25-29页 |
| 2.2.2 新型表达型T载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 质粒pHsh-ΔBfu的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.2 质粒pHsh-ΔBfu-Hkg pro的构建 | 第32页 |
| 2.3.3 质粒pHsh-ΔBfu-Hkg pro-Hkg term的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.4 质粒pre-pHsh-T的构建 | 第33页 |
| 2.3.5 最终pHsh-T载体的获得 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-37页 |
| 第三章 pHsh-T载体应用 | 第37-63页 |
| 3.1 材料 | 第37-41页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 主要化学试剂及酶 | 第37-38页 |
| 3.1.3 培养基和培养基的配制 | 第38-40页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-52页 |
| 3.2.1 嗜热厌氧菌的厌氧瓶液体培养 | 第41页 |
| 3.2.2 基因组DNA的提取及检测 | 第41-42页 |
| 3.2.3 一般基因操作方法 | 第42页 |
| 3.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-43页 |
| 3.2.5 用pHsh-T载体克隆未知序列并进行鉴定分析 | 第43-44页 |
| 3.2.6 pHsh-T载体表达实验 | 第44-50页 |
| 3.2.7 pHsh-T载体转化率实验 | 第50-51页 |
| 3.2.8 表达载体pHsh-T在文库构建方面应用 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-60页 |
| 3.3.1 未知菌株的分子鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.2 重组载体pHsh-RSP的构建与表达 | 第53-56页 |
| 3.3.3 重组载体pHsh-xyn的构建与表达 | 第56-58页 |
| 3.3.4 转化率比较实验 | 第58页 |
| 3.3.5 表达载体pHsh-T在文库构建中的应用 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 全文总结 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
