| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第1章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 磷脂酶A1辅助蛋白 | 第17-19页 |
| 1.1.1 磷脂酶A1研究概述 | 第17-18页 |
| 1.1.2 磷脂酶A1辅助蛋白研究进展 | 第18页 |
| 1.1.3 辅助蛋白研究现况 | 第18-19页 |
| 1.2 N端截短对蛋白表达影响 | 第19-21页 |
| 1.2.1 N端截短对大肠杆菌可溶性表达影响 | 第19-20页 |
| 1.2.2 N端截短应用 | 第20-21页 |
| 1.3 原核表达与标签蛋白纯化概述 | 第21页 |
| 1.4 蛋白质相互作用研究 | 第21-23页 |
| 1.4.1 蛋白质体内相互作用研究 | 第21-22页 |
| 1.4.2 蛋白质体外相互作用研究 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题的研究意义与内容 | 第23-25页 |
| 1.5.1 立项依据及研究意义 | 第23-24页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 磷脂酶A1辅助蛋白结构分析及表达菌株构建 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 实验药品与试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要实验仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 磷脂酶A1辅助蛋白结构分析 | 第27页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第27页 |
| 2.2.3 目的基因dplaS引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.4 重组质粒的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.5 重组质粒的转化 | 第30页 |
| 2.2.6 重组质粒dSP28阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第30页 |
| 2.2.7 重组质粒测序验证及保藏 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 辅助蛋白结构分析结果 | 第30-33页 |
| 2.3.2 SP28质粒的提取 | 第33页 |
| 2.3.3 目的基因dplaS扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.4 重组子的PCR和双酶切验证 | 第34-35页 |
| 2.3.5 测序结果比对 | 第35页 |
| 2.4 本章小结 | 第35-37页 |
| 第3章 辅助蛋白胞内大量可溶性表达优化及纯化 | 第37-52页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第37-40页 |
| 3.1.1 菌株 | 第37页 |
| 3.1.2 实验药品与试剂 | 第37-39页 |
| 3.1.3 主要实验仪器设备 | 第39-40页 |
| 3.1.4 培养基 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 重组菌dSP28生长曲线绘制 | 第40页 |
| 3.2.2 辅助蛋白dPlaS在LB培养基中诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.2.3 辅助蛋白dPlaS表达及不同组分TB培养基选择 | 第41页 |
| 3.2.4 蛋白样品的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.5 辅助蛋白dPlaS电泳检测 | 第42页 |
| 3.2.6 dPlaS生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 3.2.7 可溶性辅助蛋白dPlaS大量纯化及蛋白含量测定 | 第43-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 3.3.1 重组菌株生长曲线绘制 | 第44-45页 |
| 3.3.2 辅助蛋白dPlaS在LB培养基中表达检测 | 第45-46页 |
| 3.3.3 不同组分TB培养基对辅助蛋白dPlaS表达的影响 | 第46-49页 |
| 3.3.4 辅助蛋白dPlaS生物信息学分析 | 第49页 |
| 3.3.5 AKTA纯化辅助蛋白dPlaS及蛋白含量测定 | 第49-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第4章 磷脂酶A1与辅助蛋白相互作用 | 第52-74页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第52-56页 |
| 4.1.1 菌株 | 第52页 |
| 4.1.2 实验药品与试剂 | 第52-54页 |
| 4.1.3 主要实验仪器设备 | 第54页 |
| 4.1.4 培养基 | 第54-56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 4.2.1 生物信息学分析 | 第56页 |
| 4.2.2 酵母双杂交实验方法 | 第56-58页 |
| 4.2.3 共表达菌株构建 | 第58-60页 |
| 4.2.4 共表达菌株测序验证及保藏 | 第60页 |
| 4.2.5 共表达菌株生长曲线测定 | 第60页 |
| 4.2.6 共表达菌株磷脂酶A1酶活测定和蛋白电泳 | 第60页 |
| 4.2.7 Biacore蛋白互作方法 | 第60-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-72页 |
| 4.3.1 蛋白质相互作用生物信息学分析 | 第61-63页 |
| 4.3.2 酵母双杂交实验结果 | 第63-66页 |
| 4.3.3 共表达菌株鉴定 | 第66-69页 |
| 4.3.4 共表达菌株生长曲线绘制 | 第69页 |
| 4.3.5 共表达菌株酶活测定和蛋白电泳 | 第69-72页 |
| 4.3.6 Biacore蛋白互作验证 | 第72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 第5章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 结论 | 第74-75页 |
| 5.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 在校期间发表论文、专利、获奖情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
