| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 部分缩写的中英文对照 | 第10-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 布鲁氏菌 | 第15-21页 |
| 1.1.1 布鲁氏菌史 | 第15页 |
| 1.1.2 布鲁氏菌国内外疫情现状 | 第15-17页 |
| 1.1.3 布鲁氏菌属 | 第17-18页 |
| 1.1.4 布鲁氏菌病的逃逸机制 | 第18-19页 |
| 1.1.5 布鲁氏菌病的致病机制 | 第19页 |
| 1.1.6 布鲁氏菌病的发病过程及危害 | 第19页 |
| 1.1.7 布鲁氏菌检测 | 第19-20页 |
| 1.1.8 布鲁氏菌病疫苗 | 第20-21页 |
| 1.2 重叠延伸PCR | 第21-22页 |
| 1.2.1 重叠延伸PCR技术的原理 | 第21页 |
| 1.2.2 重叠延伸PCR技术的运用 | 第21-22页 |
| 1.3 PMC-221-GFP质粒 | 第22-23页 |
| 1.4 激光共聚焦显微镜 | 第23-25页 |
| 1.4.1 激光共聚焦显微镜的历史 | 第23页 |
| 1.4.2 激光共聚焦显微镜的工作原理 | 第23-24页 |
| 1.4.3 激光共聚焦显微镜在生物学中的应用 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的意义及技术路线 | 第25-27页 |
| 1.5.1 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 优化重叠延伸PCR对RBS-RFP-BDNA片段获得 | 第27-35页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第27页 |
| 2.1.1 试剂材料 | 第27页 |
| 2.1.2 试验仪器 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 RBS-RFP片段的PCR获得 | 第27-29页 |
| 2.2.2 BrucellaDNA片段的PCR获得 | 第29-30页 |
| 2.2.3 重叠延伸PCR获得RBS-RFP-BDNA片段 | 第30页 |
| 2.2.4 RBS-RFP-BDNA片段连入pLB零背景快速克隆载体 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-33页 |
| 2.3.1 PCR获得RBS-RFP片段 | 第31-32页 |
| 2.3.2 PCR获得BrucellaDNA片段 | 第32页 |
| 2.3.3 重叠延伸PCR获得RBS-RFP-BDNA片段。 | 第32-33页 |
| 2.3.4 RBS-RFP-BDNA测序结果 | 第33页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 pMC-221-RFP质粒的构建 | 第35-42页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第35页 |
| 3.1.1 试剂材料 | 第35页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-38页 |
| 3.2.1 pMC-221-GFP质粒SmaⅠ和SacⅡ双酶切 | 第35-36页 |
| 3.2.2 pLB-RBS-RFP-BDNA载体SmaI和SacII双酶切 | 第36页 |
| 3.2.3 胶回收片段的连接 | 第36页 |
| 3.2.4 布鲁氏菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 3.2.5 电转化 | 第37页 |
| 3.2.6 布鲁氏菌培养 | 第37-38页 |
| 3.2.7 布鲁氏菌表达荧光蛋白稳定性的研究 | 第38页 |
| 3.3 结果 | 第38-41页 |
| 3.3.1 pMC-221-GFP质粒SmaⅠ和SacⅡ双酶切结果 | 第38页 |
| 3.3.2 pLB-RBS-RFP-BDNA载体SmaⅠ和SacⅡ双酶切结果 | 第38-39页 |
| 3.3.3 pMC-221-RFP质粒的构建结果 | 第39-40页 |
| 3.3.4 M5-pMC-221-GFP与16M-pMC-221-RFP表达荧光蛋白稳定性的研究 | 第40-41页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 M5-pMC-221-GFP与16M-pMC-221-RFP侵染小鼠巨噬细胞的能力区别及相互作用 | 第42-48页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第42页 |
| 4.1.1 实验细胞 | 第42页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 4.2.1 细胞培养液的制备 | 第42页 |
| 4.2.2 小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养 | 第42-44页 |
| 4.2.3 M5-pMC-221-GFP与16M-pMC-221-RFP侵染小鼠巨噬细胞 | 第44-45页 |
| 4.2.3.1 M5-pMC-221-GFP与16M-pMC-221-RFP同时侵染小鼠巨噬细胞 | 第44页 |
| 4.2.3.2 M5-pMC-221-GFP先侵染小鼠巨噬细胞随后16M-pMC-221-RFP进行侵染 | 第44-45页 |
| 4.2.3.316 M-pMC-221-RFP先侵染小鼠巨噬细胞随后M5-pMC-221-GFP进行侵染 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-47页 |
| 4.3.1 M5-pMC-221-GFP与16M-pMC-221-RFP同时侵染巨噬细胞结果 | 第45-46页 |
| 4.3.2 M5-pMC-221-GFP先侵染小鼠巨噬细胞16M-pMC-221-RFP随后入侵结果 | 第46页 |
| 4.3.3 16M-pMC-221-RFP先侵染小鼠巨噬细胞M5-pMC-221-GFP随后入侵结果 | 第46-47页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 总结与展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 在学期间发表第一作者文章 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附件 | 第56页 |
