| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2 脂肪细胞分化研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 脂肪细胞的增殖与分化 | 第14-15页 |
| 1.2.2 研究脂肪细胞分化的模型 | 第15-16页 |
| 1.3 成纤维细胞的转分化现象 | 第16-17页 |
| 1.4 调控脂肪细胞分化的重要转录因子介绍 | 第17-18页 |
| 1.4.1 PPARs 家族 | 第17页 |
| 1.4.2 C/EBPs 家族 | 第17-18页 |
| 1.5 SREBPs 家族 | 第18-23页 |
| 1.5.1 SREBPs 的发现、命名及结构 | 第18-19页 |
| 1.5.2 SREBPs 前体裂解 | 第19页 |
| 1.5.3 SREBPs 基因的转录调控 | 第19-21页 |
| 1.5.4 SREBPs 与代谢疾病 | 第21页 |
| 1.5.5 参与调控脂肪细胞分化的功能基因 | 第21-23页 |
| 1.6 细胞分化与转分化检测 | 第23-24页 |
| 1.6.1 形态学观察法 | 第23页 |
| 1.6.2 分子生物学方法 | 第23-24页 |
| 1.7 表达载体系统 | 第24-26页 |
| 1.7.1 质粒载体系统 | 第24-25页 |
| 1.7.2 病毒表达载体系统 | 第25-26页 |
| 1.8 RNA 干扰 | 第26页 |
| 1.9 本研究的目标、意义和内容 | 第26-29页 |
| 1.9.1 研究目标和意义 | 第26-27页 |
| 1.9.2 研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 牛 SREBPs CDS 区的克隆、序列与组织表达特性分析 | 第29-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.2 结果 | 第33-43页 |
| 2.2.0 组织样总 RNA 提取 | 第33-34页 |
| 2.2.1 秦川牛 SREBP1 基因的克隆及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.2 秦川牛 SREBP2 基因的克隆及鉴定 | 第35页 |
| 2.2.3 SREBPs 基本理化性质分析 | 第35-36页 |
| 2.2.4 SREBPs 序列同源性分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5 基因系统进化树 | 第37页 |
| 2.2.6 跨膜结构、疏水性和信号肽预测 | 第37-40页 |
| 2.2.7 基本二级结构和功能位点预测 | 第40-41页 |
| 2.2.8 组织表达谱分析 | 第41-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-44页 |
| 2.3.1 总 RNA 的提取 | 第43页 |
| 2.3.2 基因克隆 | 第43页 |
| 2.3.3 序列同源性分析 | 第43页 |
| 2.3.4 跨膜结构 | 第43-44页 |
| 2.3.5 碱性亮氨酸拉链 | 第44页 |
| 2.3.6 组织表达特性分析 | 第44页 |
| 2.4 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 牛 SREBPs 基因重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定 | 第45-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.2 结果 | 第48-50页 |
| 3.2.1 pAdTrack-SREBPs 穿梭载体的构建 | 第48页 |
| 3.2.2 pAd-SREBPs 病毒重组子构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.3 重组腺病毒的包装、扩增与滴度测定 | 第49-50页 |
| 3.2.4 病毒有效性的鉴定 | 第50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 牛 SREBP1 基因 shRNA 序列的筛选、鉴定与病毒包装 | 第53-63页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-57页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 试验方法 | 第53-57页 |
| 4.2 结果 | 第57-61页 |
| 4.2.1 pENTR-U6-shRNA 表达载体构建 | 第57页 |
| 4.2.2 SREBP1 基因的克隆与 psiCHECKTM-Ⅱ-SREBP1 表达载体构建 | 第57-58页 |
| 4.2.3 有效 shRNA 序列的筛选 | 第58-59页 |
| 4.2.4 pAd-shRNA 病毒重组子的构建及鉴定 | 第59页 |
| 4.2.5 Ad-1053 和 Ad-NC 腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第59-60页 |
| 4.2.6 病毒有效性鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-63页 |
| 第五章 SREBPs 促进牛前体脂肪细胞分化与成纤维细胞转分化 | 第63-111页 |
| 5.1 材料与方法 | 第63-65页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 5.2 结果 | 第65-106页 |
| 5.2.1 牛前体脂肪细胞与成纤维细胞的分离培养 | 第65-68页 |
| 5.2.2 RT-PCR 引物筛选 | 第68页 |
| 5.2.3 SREBPs 对牛前体脂肪细胞形态变化的影响 | 第68-74页 |
| 5.2.4 SREBPs 对脂质代谢相关基因在前体脂肪细胞中表达的影响 | 第74-85页 |
| 5.2.5 SREBPs 对牛成纤维细胞形态变化的影响 | 第85-93页 |
| 5.2.6 SREBPs 对脂质代谢相关基因在牛成纤维细胞表达的影响 | 第93-106页 |
| 5.3 讨论 | 第106-111页 |
| 5.3.1 SREBPs 基因促进细胞中脂质的合成与沉积 | 第107-108页 |
| 5.3.2 SREBPs 基因对脂肪细胞分化相关基因的调控作用分析 | 第108-111页 |
| 5.4 小结 | 第111页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 附录 | 第112-117页 |
| 缩略词 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 作者简介 | 第131-132页 |
