| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 禽流感病毒的生物学特性以及致病机制 | 第12-22页 |
| 1.2.1 禽流感的起源和传播 | 第12-13页 |
| 1.2.2 H5N1 型禽流感的流行状况 | 第13-14页 |
| 1.2.3 高致病性禽流感 H5N1 的结构特征 | 第14-16页 |
| 1.2.4 H5N1 致病机制的分子基础 | 第16-20页 |
| 1.2.5 H5N1 变异的分子机制 | 第20-22页 |
| 1.3 RNF31 生物学特性、结构及功能 | 第22-24页 |
| 1.3.1 RNF31 生物学特性 | 第22-23页 |
| 1.3.2 RNF31 的结构与功能 | 第23-24页 |
| 1.3.3 RNF31 与 NF-κB 通路的关系 | 第24页 |
| 1.4 NF-κB 信号通路 | 第24-26页 |
| 1.5 流感病毒与 NF-κB 信号通路的关系 | 第26-27页 |
| 1.6 慢病毒载体 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-38页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.2 禽流感病毒蛋白与宿主蛋白作用网络生物信息学分析材料 | 第30页 |
| 2.3 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.3.1 细胞株 | 第30页 |
| 2.3.2 菌株、载体及质粒 | 第30页 |
| 2.3.3 试剂 | 第30-31页 |
| 2.4 常用溶液的配制 | 第31-32页 |
| 2.4.1 细胞培养相关溶液 | 第31页 |
| 2.4.2 细菌培养相关溶液 | 第31页 |
| 2.4.3 细胞裂解溶液 | 第31页 |
| 2.4.4 琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第31-32页 |
| 2.4.5 Western Blot 相关试剂 | 第32页 |
| 2.5 实验方法 | 第32-38页 |
| 2.5.1 一般细胞培养条件 | 第32-33页 |
| 2.5.2 载体构建 | 第33页 |
| 2.5.3 转染 | 第33页 |
| 2.5.4 细胞总蛋白的提取 | 第33页 |
| 2.5.5 核质分离 | 第33-34页 |
| 2.5.6 免疫印迹(Western Blotting) | 第34页 |
| 2.5.7 免疫共沉淀 | 第34页 |
| 2.5.8 细胞 RNA 提取 | 第34页 |
| 2.5.9 反转录 | 第34-35页 |
| 2.5.10 Real-time PCR | 第35页 |
| 2.5.11 shRNA 载体构建 | 第35页 |
| 2.5.12 慢病毒包装、浓缩、感染及滴度测定 | 第35-36页 |
| 2.5.13 流式检测细胞周期 | 第36页 |
| 2.5.14 流式检测细胞凋亡 | 第36页 |
| 2.5.15 Hochest 染色检测细胞凋亡 | 第36页 |
| 2.5.16 双荧光素酶报告基因实验 | 第36页 |
| 2.5.17 间接免疫荧光 | 第36-37页 |
| 2.5.18 蛋白稳定性实验 | 第37页 |
| 2.5.19 统计学分析 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-67页 |
| 第一部分 H5N1 禽流感病毒蛋白与宿主蛋白相互作用数据库分析 | 第38-47页 |
| 3.1 H5N1 禽流感病毒蛋白与宿主蛋白网络构建及宿主蛋白功能分析 | 第38-47页 |
| 3.1.1 相互作用网络构建及拓扑结构分析 | 第38-39页 |
| 3.1.2 流感病毒相互作用蛋白的生物学特征分析 | 第39-40页 |
| 3.1.3 病毒蛋白参与机体一些重要信号通路 | 第40-42页 |
| 3.1.4 与其它流感病毒相互作用数据的 Overlap 分析 | 第42-43页 |
| 3.1.5 与其他流感病毒共同的相互作用蛋白的 GO 分析 | 第43页 |
| 3.1.6 与其它流感病毒不同的相互作用蛋白的 GO 分析 | 第43-44页 |
| 3.1.7 与其他病原体相互作用数据的 Overlap 分析 | 第44-45页 |
| 3.1.8 与其他病原体共同的相互作用蛋白的 GO 分析 | 第45-46页 |
| 3.1.9 与其它病原体不同的相互作用蛋白的 GO 分析 | 第46页 |
| 3.1.10 小结 | 第46-47页 |
| 第二部分 PB2 与 RNF31 相互作用的研究 | 第47-67页 |
| 3.2 PB2 与 RNF31 存在相互作用 | 第48-53页 |
| 3.2.1 外源免疫共沉淀(Co-IP)验证 PB2 与 RNF31 存在相互作用 | 第48-50页 |
| 3.2.2 PB2 与 RNF31 相互作用结构域研究 | 第50-52页 |
| 3.2.3 PB2 与 RNF31 共定位于胞核 | 第52-53页 |
| 3.3 PB2 通过 RNF31 下调 NF-κB 转录活性 | 第53-64页 |
| 3.3.1 pGreenPuro-RNF31 干涉载体构建及干涉效果鉴定 | 第53-56页 |
| 3.3.2 下调 RNF31 抑制 NF-κB 转录活性 | 第56页 |
| 3.3.3 下调 RNF31 抑制 NF-κB 下游靶基因表达 | 第56-57页 |
| 3.3.4 下调 RNF31 抑制 IκBα活化 | 第57-58页 |
| 3.3.5 下调 RNF31 促进 TNF-α诱导的细胞凋亡 | 第58-59页 |
| 3.3.6 PB2 通过 RNF31 抑制 NF-κB 转录活性 | 第59-61页 |
| 3.3.7 PB2 抑制 NF-κB 下游靶基因表达 | 第61-62页 |
| 3.3.8 PB2 通过 RNF31 影响 IκBα的活化 | 第62页 |
| 3.3.9 PB2 细胞生物学效应 | 第62-64页 |
| 3.4 RNF31 微弱影响 PB2 稳定性 | 第64-65页 |
| 3.5 RNF31 促进 PB2 与 PB1 相互作用 | 第65-66页 |
| 3.6 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 结论和展望 | 第67-68页 |
| 4.1 结论 | 第67页 |
| 4.2 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-84页 |
