| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一篇 拟南芥生长素结合蛋白在昆虫细胞中表达和纯化 | 第13-61页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| 1.1 蛋白质表达系统概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第14-15页 |
| 1.1.2 真核表达系统的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 | 第16-18页 |
| 1.2.1 昆虫细胞培养研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 杆状病毒表达载体的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.3 杆状病毒-昆虫细胞表达系统的局限性 | 第18页 |
| 1.2.4 昆虫细胞工程研究进展 | 第18页 |
| 1.3 生长素研究概述 | 第18-20页 |
| 1.3.1 生长素的发现简史 | 第19页 |
| 1.3.2 生长素的生物学功能 | 第19-20页 |
| 1.4 生长素结合蛋白与TMK的生物学功能 | 第20-23页 |
| 1.4.1 ABP1的相关功能研究 | 第20-22页 |
| 1.4.2 Germin家族成员与生长素结合蛋白 | 第22-23页 |
| 1.4.3 TMK的相关功能研究 | 第23页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 实验用菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 实验用细胞株 | 第25-27页 |
| 2.1.3 实验用载体 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 实验常用试剂配制 | 第28-30页 |
| 2.2.2 原核表达系统克隆构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 原核表达系统中的蛋白表达 | 第31-32页 |
| 2.2.4 真核表达系统克隆构建 | 第32页 |
| 2.2.5 蓝白斑筛选及重组杆粒的提取与包装 | 第32-35页 |
| 2.2.6 重组病毒的扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.7 真核表达系统中的蛋白表达 | 第36页 |
| 2.3.8 昆虫细胞中蛋白的分泌表达 | 第36-37页 |
| 2.2.9 免疫印迹鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.10 胞内蛋白的提取纯化 | 第38-40页 |
| 2.2.11 分泌蛋白的提取纯化 | 第40页 |
| 2.2.12 基于分子筛层析色谱的蛋白质相互作用试验 | 第40-41页 |
| 2.2.13 放射性配基与受体结合分析 | 第41-42页 |
| 第3章 结果 | 第42-55页 |
| 3.1 生长素结合蛋白的一级结构比对和预测的三维结构 | 第42-44页 |
| 3.1.1 生长素结合蛋白的一级结构比对和分析 | 第42-43页 |
| 3.1.2 生长素结合蛋白的三维结构预测和比对 | 第43-44页 |
| 3.2 大肠杆菌中表达的生长素结合蛋白的纯化与分析 | 第44-45页 |
| 3.2.1 ABP1及ABL蛋白在大肠杆菌中的表达纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.2 大肠杆菌表达的ABP1及ABL蛋白的分子筛层析色谱分析 | 第45页 |
| 3.3 昆虫细胞内表达的生长素结合蛋白的纯化与分析 | 第45-49页 |
| 3.3.1 ABP1在昆虫细胞中的表达与鉴定 | 第46页 |
| 3.3.2 ABP1在昆虫细胞中的大量表达与纯化 | 第46-47页 |
| 3.3.3 ABL在昆虫细胞中的表达与鉴定 | 第47-49页 |
| 3.3.4 ABL在昆虫细胞中的大量表达与纯化 | 第49页 |
| 3.4 生长素结合蛋白与TMK1胞外域在昆虫细胞中的分泌与纯化 | 第49-52页 |
| 3.4.1 ABL蛋白在昆虫细胞中的分泌 | 第50-51页 |
| 3.4.2 ABP1在昆虫细胞中的分泌与纯化 | 第51页 |
| 3.4.3 TMK1胞外域在昆虫细胞中的分泌与纯化 | 第51-52页 |
| 3.5 ABP1与TMK1胞外域的体外互作分析 | 第52-53页 |
| 3.6 放射性标记的生长素结合试验 | 第53-55页 |
| 第4章 总结与讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 总结 | 第55-56页 |
| 4.2 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 第二篇 酵母磷感应蛋白复合物的表达、体外装配和纯化结晶 | 第61-94页 |
| 第1章 引言 | 第61-69页 |
| 1.1 目的蛋白在大肠杆菌中的表达优化 | 第61-62页 |
| 1.2 蛋白质纯化方法概述 | 第62-64页 |
| 1.2.1 蛋白质纯化的目标与原则 | 第62-63页 |
| 1.2.2 蛋白质各纯化方法的依据 | 第63-64页 |
| 1.3 多元蛋白在大肠杆菌中的共表达 | 第64-65页 |
| 1.3.1 基于多质粒共转化的共表达 | 第64-65页 |
| 1.3.2 单质粒整合多基因在大肠杆菌中的共表达 | 第65页 |
| 1.4 蛋白质结晶研究进展 | 第65-66页 |
| 1.5 酵母PHO途径研究背景 | 第66-67页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第67-69页 |
| 第2章 材料与方法 | 第69-74页 |
| 2.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 2.1.1 实验用菌株 | 第69页 |
| 2.1.2 实验用载体 | 第69-70页 |
| 2.2 实验方法 | 第70-74页 |
| 2.2.1 初级克隆构建与鉴定 | 第70-71页 |
| 2.2.2 多元共表达系统及克隆构建鉴定 | 第71页 |
| 2.2.3 蛋白表达 | 第71-72页 |
| 2.2.4 蛋白纯化 | 第72页 |
| 2.2.5 结晶条件的筛选与优化 | 第72-74页 |
| 第3章 结果 | 第74-88页 |
| 3.1 PHO81的结构域组成分析与二级结构分析 | 第74-76页 |
| 3.1.1 PHO81的结构域组成分析 | 第74页 |
| 3.1.2 PHO81 SPX结构域的序列保守性分析和二级结构比对 | 第74-76页 |
| 3.2 PHO81的表达纯化与蛋白性质分析 | 第76-82页 |
| 3.2.1 PHO81全长的表达纯化 | 第76页 |
| 3.2.2 PHO81不同片段的表达纯化 | 第76-78页 |
| 3.2.3 PHO81-MD的表达纯化 | 第78-79页 |
| 3.2.4 PHO81蛋白SPX结构域的表达纯化 | 第79-80页 |
| 3.2.5 PHO81-SPX结构域点突变后蛋白的表达纯化 | 第80-81页 |
| 3.2.6 PHO81不同片段与PHO80和PHO85的共表达 | 第81-82页 |
| 3.3 PHO80与PHO85的体外互作 | 第82-83页 |
| 3.4 PHO80与PHO85的共表达及纯化结晶 | 第83-85页 |
| 3.4.1 PHO80与PHO85的共表达和纯化 | 第83-85页 |
| 3.4.2 PHO80与PHO85的共结晶 | 第85页 |
| 3.5 PHO80-PHO85与PHO81的体外互作与体外装配 | 第85-88页 |
| 3.5.1 PHO80-PHO85与PHO81蛋白MD结构域的体外互作试验 | 第85-86页 |
| 3.5.2 PHO80-PHO85与PHO81蛋白SPX结构域的体外互作试验 | 第86-88页 |
| 第4章 总结与讨论 | 第88-91页 |
| 4.1 总结 | 第88-89页 |
| 4.2 讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 附录 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
