| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-30页 |
| 1.1 脯氨酰蛋白酶的研究进展和应用 | 第10-20页 |
| 1.1.1 脯氨酰蛋白酶简介及其特征 | 第10-13页 |
| 1.1.2 脯氨酰蛋白酶的来源 | 第13-16页 |
| 1.1.3 脯氨酰蛋白酶的应用领域及研究进展 | 第16-18页 |
| 1.1.4 黑曲霉来源的脯氨酰蛋白酶的应用和研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2 丝状真菌作为表达宿主的特点 | 第20-27页 |
| 1.2.1 丝状真菌表达系统的研究现状 | 第20-23页 |
| 1.2.2 丝状真菌的遗传学背景和外分泌酶系 | 第23-25页 |
| 1.2.3 丝状真菌遗传背景的改造 | 第25-27页 |
| 1.3 课题来源、研究内容和意义 | 第27-30页 |
| 1.3.1 课题来源及项目支持 | 第27页 |
| 1.3.2 课题研究内容 | 第27-28页 |
| 1.3.3 课题研究意义 | 第28-30页 |
| 第二章 脯氨酰蛋白酶在无孢黑曲霉中的表达及表达框结构的优化 | 第30-73页 |
| 2.1 引言 | 第30-31页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第31-37页 |
| 2.2.1 主要实验材料 | 第31-34页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第35页 |
| 2.2.4 引物序列 | 第35-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-57页 |
| 2.3.1 黑曲霉来源脯氨酰蛋白酶的氨基酸序列分析 | 第37-38页 |
| 2.3.2 构建脯氨酰蛋白酶表达质粒 | 第38-52页 |
| 2.3.3 无孢黑曲霉的转化及高产脯氨酰蛋白酶转化子的筛选 | 第52-57页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第57-71页 |
| 2.4.1 黑曲霉来源脯氨酰蛋白酶的氨基酸序列分析 | 第57-61页 |
| 2.4.2 构建脯氨酰蛋白酶表达质粒 | 第61-65页 |
| 2.4.3 无孢黑曲霉的转化及高产脯氨酰蛋白酶转化子的筛选 | 第65-71页 |
| 2.5 本章小结 | 第71-73页 |
| 第三章 黑曲霉遗传背景的改造及脯氨酰蛋白酶在改造后宿主中的表达 | 第73-92页 |
| 3.1 引言 | 第73页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第73-76页 |
| 3.2.1 主要实验材料 | 第73-74页 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 | 第74页 |
| 3.2.3 菌株和质粒 | 第74页 |
| 3.3.4 引物序列 | 第74-76页 |
| 3.3 实验方法 | 第76-85页 |
| 3.3.1 敲除无孢黑曲霉 pyrG 基因 | 第76-80页 |
| 3.3.2 敲除无孢黑曲霉 kusA 基因 | 第80-84页 |
| 3.3.3 在遗传改造后的黑曲霉宿主中表达脯氨酰蛋白酶 | 第84-85页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第85-90页 |
| 3.4.1 敲除无孢黑曲霉 pyrG 基因 | 第85-88页 |
| 3.4.2 敲除无孢黑曲霉 kusA 基因 | 第88-90页 |
| 3.4.3 在遗传改造后的黑曲霉宿主内表达脯氨酰蛋白酶 | 第90页 |
| 3.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第四章 经基因敲除改造后的脯氨酰蛋白酶转化子 5L 发酵罐发酵小试 | 第92-102页 |
| 4.1 引言 | 第92页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第92-93页 |
| 4.2.1 实验用试剂 | 第92-93页 |
| 4.2.2 使用的培养基和试剂 | 第93页 |
| 4.2.3 使用的仪器设备 | 第93页 |
| 4.3 实验方法 | 第93-96页 |
| 4.3.1 种子培养基的培养 | 第93-94页 |
| 4.3.2 发酵罐发酵 | 第94-95页 |
| 4.3.3 参数测定 | 第95-96页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第96-101页 |
| 4.4.1 发酵过程参数控制 | 第96-97页 |
| 4.4.2 发酵液生物学参数测定 | 第97-99页 |
| 4.4.3 菌丝形态观察 | 第99-101页 |
| 4.5 本章小结 | 第101-102页 |
| 结论和展望 | 第102-104页 |
| 本论文创新点 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-110页 |
| 硕士研究生学习阶段发表的学术论文和专利 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第112页 |
