| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 猪圆环病毒概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 PCV的基本结构和理化性质 | 第12-13页 |
| 1.1.2 PCV基因分析 | 第13-14页 |
| 1.1.3 PCV2的分离与复制 | 第14-15页 |
| 1.2 PCV2的影响 | 第15-17页 |
| 1.2.1 PMWS的分布及危害 | 第15页 |
| 1.2.2 PCV2流行病学特点 | 第15-16页 |
| 1.2.3 PCV2的传染路径 | 第16-17页 |
| 1.3 PCV2的诊断、预防与控制 | 第17-19页 |
| 1.3.1 PCV2的诊断 | 第17-18页 |
| 1.3.2 PCV2的预防与控制 | 第18-19页 |
| 1.4 Cap蛋白免疫原性的研究 | 第19页 |
| 1.5 单克隆抗体的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5.1 单克隆抗体的相关研究 | 第19-20页 |
| 1.5.2 抗原表位的鉴定 | 第20页 |
| 1.6 PCV2的表位分析 | 第20-21页 |
| 1.7 研究的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 PCV2 Cap蛋白的原核表达和抗原性比较 | 第22-25页 |
| 2.1.1 病毒、细胞、质粒载体和菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第22页 |
| 2.1.4 PCV2 Cap蛋白基因的扩增与鉴定 | 第22-23页 |
| 2.1.5 PCV2 Cap蛋白原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.1.6 Cap蛋白原核表达及SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
| 2.1.7 原核表达Cap蛋白纯化 | 第25页 |
| 2.1.8 原核表达与真核表达Cap蛋白的反应原性比较 | 第25页 |
| 2.2 PCV2 Cap蛋白单克隆抗体的制备和鉴定 | 第25-29页 |
| 2.2.1 主要实验动物、细胞和试剂 | 第25页 |
| 2.2.2 主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.2.3 动物免疫 | 第26页 |
| 2.2.4 间接ELISA方法的建立 | 第26页 |
| 2.2.5 细胞融合 | 第26-27页 |
| 2.2.6 阳性杂交瘤细胞的筛选与培养 | 第27-28页 |
| 2.2.7 单克隆抗体特性鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.8 腹水的制备与纯化 | 第29页 |
| 2.2.9 上清与腹水效价的检测 | 第29页 |
| 2.3 PCV2 Cap蛋白抗原表位鉴定 | 第29-35页 |
| 2.3.1 主要质粒和菌株 | 第29页 |
| 2.3.2 Cap蛋白的截短表达 | 第29-33页 |
| 2.3.3 Cap蛋白抗原表位的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.4 Cap蛋白抗原表位空间位置分析 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-47页 |
| 3.1 PCV2 Cap蛋白原核表达结果鉴定 | 第35-38页 |
| 3.1.1 Cap蛋白基因PCR扩增 | 第35页 |
| 3.1.2 重组质粒pET-Cap的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.3 Cap蛋白的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 3.1.4 Cap蛋白原核表达与真核表达的比较 | 第37-38页 |
| 3.2 PCV2 Cap蛋白单克隆抗体的制备 | 第38-41页 |
| 3.2.1 间接ELISA方法的确立 | 第38页 |
| 3.2.2 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第38页 |
| 3.2.3 单克隆抗体分泌的稳定性检测 | 第38页 |
| 3.2.4 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.5 单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第39页 |
| 3.2.6 单克隆抗体的IFA鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.7 纯化腹水的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| 3.2.8 腹水的效价分析 | 第41页 |
| 3.3 Cap蛋白截短表达结果鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3.1 重组载体酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组载体菌液PCR扩增鉴定 | 第42页 |
| 3.3.3 截短蛋白SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| 3.4 Cap蛋白抗原表位鉴定 | 第43-46页 |
| 3.4.1 Cap蛋白抗原表位初步鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4.2 Cap蛋白抗原表位精确鉴定 | 第44-46页 |
| 3.5 Cap蛋白抗原表位图谱绘制分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 Cap蛋白的原核表达与酵母表达的比较 | 第47页 |
| 4.2 Cap蛋白的单克隆抗体制备和鉴定 | 第47-49页 |
| 4.3 Cap蛋白的抗原表位鉴定 | 第49页 |
| 4.4 Cap蛋白的抗原表位图谱绘制分析 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
