| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 符号说明及缩写词 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-34页 |
| 1.1 粘球菌 | 第18-21页 |
| 1.1.1 粘细菌概述 | 第18-19页 |
| 1.1.2 粘细菌中的次级代谢产物 | 第19-21页 |
| 1.2 埃博霉素 | 第21-26页 |
| 1.2.1 埃博霉素及其产生菌概述 | 第21-22页 |
| 1.2.2 埃博霉素生物合成基因簇 | 第22-24页 |
| 1.2.3 埃博霉素基因簇的异源表达 | 第24-25页 |
| 1.2.4 埃博霉素的合成底物 | 第25-26页 |
| 1.3 代谢工程基因表达技术 | 第26-33页 |
| 1.3.1 过表达系统 | 第26-27页 |
| 1.3.2 启动子工程 | 第27-33页 |
| 1.4 课题研究思路及研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 串联启动子簇及内源性启动子活性分析 | 第34-55页 |
| 引言 | 第34-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第35-37页 |
| 2.1.2 实验中用到的引物 | 第37-38页 |
| 2.1.3 常用的分子生物学试剂及试剂盒 | 第38页 |
| 2.1.4 试剂配制方法 | 第38-39页 |
| 2.1.5 培养基 | 第39页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-46页 |
| 2.2.1 目的片段的PCR扩增和回收处理 | 第40-42页 |
| 2.2.3 连接产物制备 | 第42页 |
| 2.2.4 热击转化 | 第42-43页 |
| 2.2.5 大肠杆菌中质粒粗提检测 | 第43页 |
| 2.2.6 大肠杆菌MIC测定 | 第43页 |
| 2.2.7 大肠杆菌荧光检测 | 第43-44页 |
| 2.2.8 黄色粘球菌突变株的构建 | 第44-45页 |
| 2.2.9 黄色粘球菌荧光检测 | 第45-46页 |
| 2.2.10 黄色粘球菌生长曲线测定 | 第46页 |
| 2.2.11 黄色粘球菌菌株保存方法 | 第46页 |
| 2.3 实验结果及讨论 | 第46-54页 |
| 2.3.1 串联启动子簇的构建 | 第46-48页 |
| 2.3.2 串联启动子簇在大肠杆菌中的活性分析 | 第48-52页 |
| 2.3.3 串联启动子簇在黄色粘球菌中的活性分析 | 第52-54页 |
| 2.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第三章 串联启动子簇的应用 | 第55-79页 |
| 引言 | 第55-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第56-60页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第56-57页 |
| 3.1.2 实验中用到的引物 | 第57-58页 |
| 3.1.3 常用的分子生物学试剂及试剂盒 | 第58页 |
| 3.1.4 试剂配制方法 | 第58-59页 |
| 3.1.5 培养基 | 第59-60页 |
| 3.1.6 仪器设备 | 第60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-64页 |
| 3.2.1 目的片段的PCR扩增和回收处理 | 第60页 |
| 3.2.2 大肠杆菌感受态制作 | 第60页 |
| 3.2.3 大肠杆菌的热击转化 | 第60页 |
| 3.2.4 大肠杆菌中质粒粗提检测 | 第60页 |
| 3.2.5 黄色粘球菌突变株的构建 | 第60-61页 |
| 3.2.6 黄色粘球菌生长曲线测定 | 第61页 |
| 3.2.7 黄色粘球菌发酵方法 | 第61页 |
| 3.2.8 HPLC检测埃博霉素产量 | 第61-62页 |
| 3.2.9 黄色粘球菌中总RNA提取 | 第62页 |
| 3.2.10 反转录扩增cDNA | 第62-63页 |
| 3.2.11 荧光定量PCR | 第63-64页 |
| 3.3 实验结果 | 第64-78页 |
| 3.3.1 串联启动子簇插入载体的构建 | 第64-66页 |
| 3.3.2 串联启动子簇突变株的构建 | 第66-70页 |
| 3.3.3 串联启动子菌株埃博霉素产量及其生长水平分析 | 第70-75页 |
| 3.3.4 串联启动子菌株中埃博霉素转录水平分析 | 第75-78页 |
| 3.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第四章 黄色粘球菌中关键酶基因对埃博霉素产量影响分析 | 第79-96页 |
| 引言 | 第79-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第80-83页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第80-81页 |
| 4.1.2 实验中用到的引物 | 第81页 |
| 4.1.3 常用的分子生物学试剂及试剂盒 | 第81-82页 |
| 4.1.4 试剂配制方法 | 第82页 |
| 4.1.5 培养基 | 第82页 |
| 4.1.6 仪器设备 | 第82-83页 |
| 4.2 实验方法 | 第83-84页 |
| 4.2.1 目的片段的PCR扩增和回收处理 | 第83页 |
| 4.2.2 大肠杆菌的热击转化 | 第83页 |
| 4.2.3 大肠杆菌中质粒粗提检测 | 第83页 |
| 4.2.4 黄色粘球菌突变株的构建 | 第83页 |
| 4.2.5 黄色粘球菌生长曲线测定 | 第83页 |
| 4.2.6 黄色粘球菌发酵方法 | 第83页 |
| 4.2.7 HPLC检测埃博霉素产量 | 第83页 |
| 4.2.8 黄色粘球菌粗酶液制备 | 第83-84页 |
| 4.2.9 酯酰辅酶A合成酶(ACS)酶活检测 | 第84页 |
| 4.2.10 S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAM)酶活检测 | 第84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-94页 |
| 4.3.1 关键酶基因SAMs对埃博霉素产量影响分析 | 第84-88页 |
| 4.3.2 关键酶基因ACS对埃博霉素产量影响分析 | 第88-91页 |
| 4.3.3 过表达菌株酶含量分析 | 第91-94页 |
| 4.4 本章小结 | 第94-96页 |
| 总结与展望 | 第96-98页 |
| 附录 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第107-108页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第108页 |
