| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 多杀性巴氏杆菌研究概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 流行现状 | 第11页 |
| 1.1.2 传播途径 | 第11-12页 |
| 1.1.3 危害 | 第12页 |
| 1.2 病原学 | 第12-13页 |
| 1.2.1 分类、生长特性及理化性质 | 第12-13页 |
| 1.2.2 抗原与血清型 | 第13页 |
| 1.3 主要毒力因子的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3.1 脂多糖 | 第14页 |
| 1.3.2 荚膜 | 第14-15页 |
| 1.3.3 多杀性巴氏杆菌毒素 | 第15页 |
| 1.3.4 外膜蛋白 | 第15-17页 |
| 1.3.5 调控蛋白 | 第17页 |
| 1.4 临床症状 | 第17-18页 |
| 1.5 诊断方法 | 第18-19页 |
| 1.5.1 病原学诊断 | 第18页 |
| 1.5.2 血清学诊断 | 第18-19页 |
| 1.5.3 分子生物学诊断 | 第19页 |
| 1.6 多杀性巴氏杆菌的防治 | 第19页 |
| 1.7 疫苗的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.7.1 灭活菌苗 | 第20页 |
| 1.7.2 亚单位疫苗 | 第20-21页 |
| 1.7.3 弱毒疫苗 | 第21页 |
| 1.8 研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验动物、细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 C51-17菌株基因组的提取 | 第25页 |
| 2.2.2 引物合成与设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 多杀性巴氏杆菌Lon蛋白酶的ATPase活性检测 | 第26-28页 |
| 2.2.4 自杀性质粒的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.5 多杀性巴氏杆菌C51-17电转化感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.6 自杀性质粒的电转化 | 第31-32页 |
| 2.2.7 突变株的筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.8 突变株的生物学特性 | 第33页 |
| 2.2.9 Δlon突变株抗逆性实验 | 第33页 |
| 2.2.10 突变株的粘附特性实验 | 第33-34页 |
| 2.2.11 突变株的致病性试验 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-46页 |
| 3.1 Lon蛋白酶的ATPase活性检测 | 第35-38页 |
| 3.1.1 重组表达质粒pET30a-Lon的鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.1.2 重组蛋白的表达、纯化和western blot检测结果 | 第36-37页 |
| 3.1.3 ELISA检测Lon蛋白多克隆抗体的效价结果 | 第37页 |
| 3.1.4 Lon蛋白酶ATPase活性检测 | 第37-38页 |
| 3.2 lon上下游同源臂的PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| 3.3 自杀性质粒的酶切鉴定结果 | 第39-40页 |
| 3.4 自杀性质粒PBC-Δlon的电转化及Δlon突变株的筛选结果 | 第40-46页 |
| 3.4.1 Δlon突变株的PCR鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.4.2 Δlon突变株的生物学特性测定结果 | 第41-43页 |
| 3.4.3 突变株抗逆特性结果分析 | 第43-44页 |
| 3.4.4 Δlon突变株的粘附试验结果 | 第44页 |
| 3.4.5 Δlon对小鼠的致病性结果 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 Lon蛋白酶ATPase检测 | 第46页 |
| 4.2 细菌突变株构建技术 | 第46-47页 |
| 4.3 细菌的生长特性及对细胞的粘附 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
