| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-32页 |
| 1.1 鸭坦布苏病毒感染研究进展 | 第16-26页 |
| 1.1.1 病原学 | 第16-22页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第22-23页 |
| 1.1.3 临床症状 | 第23页 |
| 1.1.4 病理变化 | 第23-24页 |
| 1.1.5 诊断方法 | 第24-26页 |
| 1.1.6 防控措施 | 第26页 |
| 1.2 蛋白质相互作用技术简介 | 第26-31页 |
| 1.2.1 酵母双杂交系统 | 第26-29页 |
| 1.2.2 GSTPulldown技术 | 第29-30页 |
| 1.2.3 其他蛋白质互作技术 | 第30-31页 |
| 1.3 本研究目的及意义 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-57页 |
| 2.1 材料 | 第32-36页 |
| 2.1.1 菌株、毒株、载体及细胞 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第32-35页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.2 方法 | 第36-57页 |
| 2.2.1 与鸭坦布苏病毒NS1蛋白相互作用宿主蛋白的筛选 | 第36-46页 |
| 2.2.1.1 诱饵质粒的构建 | 第36-41页 |
| 2.2.1.2 Y2H酵母感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.1.3 诱饵质粒转染Y2H酵母感受态细胞 | 第42-43页 |
| 2.2.1.4 诱饵的毒性及自激活检测 | 第43页 |
| 2.2.1.5 cDNA文库滴度的测定 | 第43页 |
| 2.2.1.6 酵母融合 | 第43-44页 |
| 2.2.1.7 杂交效率计算 | 第44页 |
| 2.2.1.8 筛选 | 第44-45页 |
| 2.2.1.9 阳性质粒的提取及鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.2 坦布苏病毒NS1蛋白与宿主蛋白的GST-Pulldown验证 | 第46-54页 |
| 2.2.2.1 重组原核表达载体pGEX-6p-1-NS1的构建与表达 | 第46-50页 |
| 2.2.2.2 重组真核表达载体pEGFP-RPS7的构建与表达 | 第50-52页 |
| 2.2.2.3 GST-PullDown试验验证 | 第52-54页 |
| 2.2.3 qRT-PCR分析RPS7-MDM2-P53信号通路 | 第54-57页 |
| 2.2.3.1 重组质粒pEGFP-NS1的真核表达 | 第54-55页 |
| 2.2.3.2 荧光定量试验分析RPS7-MDM2-P53信号通路 | 第55-57页 |
| 3 结果 | 第57-68页 |
| 3.1 酵母双杂交试验 | 第57-62页 |
| 3.1.1 NS1基因的PCR扩增 | 第57页 |
| 3.1.2 诱饵质粒pGBKT7-NS1的构建和双酶切验证 | 第57-58页 |
| 3.1.3 诱饵质粒转染Y2H酵母感受态细胞 | 第58-59页 |
| 3.1.4 诱饵质粒pGBKT7-NS1的毒性及自激活检测 | 第59-60页 |
| 3.1.5 cDNA文库滴度的测定 | 第60页 |
| 3.1.6 诱饵质粒pGBKT7-NS1与鸭胚成纤维细胞cDNA文库的双杂交筛选 | 第60-61页 |
| 3.1.7 杂交效率的计算 | 第61页 |
| 3.1.8 阳性质粒的鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2 GST-Pulldown试验 | 第62-67页 |
| 3.2.1 重组原核表达载体pGEX-6p-1-NS1的构建与表达 | 第62-64页 |
| 3.2.2 重组真核表达载体pEGFP-RPS7的构建与表达 | 第64-65页 |
| 3.2.3 诱饵蛋白与猎物蛋白浓度测定 | 第65-66页 |
| 3.2.4 GST-Pulldown试验结果 | 第66-67页 |
| 3.3 信号通路RPS7-MDM2-P53的荧光定量试验结果 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第82页 |
