| 缩略表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一部分: 在小鼠原位瘤模型中进一步验证KIAA1199促进结肠癌转移的作用 | 第14-34页 |
| 1.1 前言 | 第14-15页 |
| 1.2 材料与方法 | 第15-25页 |
| 1.2.1 实验仪器与耗材 | 第15-17页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.2.3 细胞的复苏 | 第18页 |
| 1.2.4 细胞传代 | 第18-19页 |
| 1.2.5 免疫印迹(Western blot) | 第19-22页 |
| 1.2.6 荧光素酶活性检测 | 第22页 |
| 1.2.7 构建稳定细胞株(KIAA1199稳定下调细胞株) | 第22-23页 |
| 1.2.8 构建原位结肠癌模型 | 第23页 |
| 1.2.9 小动物活体成像 | 第23-24页 |
| 1.2.10 免疫组化(IHC) | 第24-25页 |
| 1.2.11 统计学分析 | 第25页 |
| 1.3 结果 | 第25-32页 |
| 1.3.1 构建KIAA1199稳定下调细胞株 | 第25-27页 |
| 1.3.2 构建KIAA1199下调的NOD-SCID小鼠原位结肠癌模型 | 第27页 |
| 1.3.3 下调KIAA1199抑制小鼠原位结肠癌细胞的转移 | 第27-32页 |
| 1.4 讨论 | 第32-33页 |
| 1.5 小结 | 第33-34页 |
| 第二部分: KIAA1199与PP2A相结合及其对PP2A磷酸酶活性的影响 | 第34-56页 |
| 2.1 前言 | 第34-35页 |
| 2.2 材料与方法 | 第35-45页 |
| 2.2.1 实验仪器与耗材 | 第35-37页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.2.3 细胞的复苏 | 第38页 |
| 2.2.4 细胞传代 | 第38-39页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀(CO-IP) | 第39-40页 |
| 2.2.6 免疫印迹(Western blot) | 第40页 |
| 2.2.7 质谱分析(LC-MS/MS) | 第40-41页 |
| 2.2.8 质粒构建与共转染 | 第41页 |
| 2.2.9 Pulldown实验 | 第41-42页 |
| 2.2.10 PP2A磷酸酶活性检测 | 第42页 |
| 2.2.11 增殖实验(CCK-8) | 第42-43页 |
| 2.2.12 Transwell迁移/侵袭实验 | 第43-44页 |
| 2.2.13 划痕实验 | 第44页 |
| 2.2.14 3-D侵袭实验 | 第44页 |
| 2.2.15 统计学分析 | 第44-45页 |
| 2.3 实验结果 | 第45-53页 |
| 2.3.1 KIAA1199与PP2A Cα、PP2A B56γ相互结合作用 | 第45-47页 |
| 2.3.2 确定KIAA1199与PP2A Cα、PP2A B56γ的结合区域 | 第47-49页 |
| 2.3.3 KIAA1199对PP2A磷酸酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 2.3.4 PP2A抑制剂对KIAA1199促进结肠癌细胞转移的影响 | 第50-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-56页 |
| 第三部分: KIAA1199通过PP2A/Stathmin途径促进结肠癌细胞转移的作用机制 | 第56-75页 |
| 3.1 前言 | 第56页 |
| 3.2 材料与方法 | 第56-64页 |
| 3.2.1 实验仪器与耗材 | 第56-58页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第58-60页 |
| 3.2.3 细胞的复苏 | 第60页 |
| 3.2.4 细胞传代 | 第60页 |
| 3.2.5 质粒共转染 | 第60-61页 |
| 3.2.6 免疫印迹(Western blot) | 第61页 |
| 3.2.7 免疫共沉淀(CO-IP) | 第61-62页 |
| 3.2.8 激光共聚焦 | 第62页 |
| 3.2.9 小干扰siRNA敲低Stathmin表达 | 第62页 |
| 3.2.10 Transwell迁移侵袭实验 | 第62-63页 |
| 3.2.11 划痕实验 | 第63页 |
| 3.2.12 免疫组化(IHC) | 第63-64页 |
| 3.2.13 统计学分析 | 第64页 |
| 3.3 实验结果 | 第64-73页 |
| 3.3.1 Stathmin是PP2A/KIAA1199复合物的下游底物 | 第64-66页 |
| 3.3.2 KIAA1199对磷酸化Stathmin蛋白水平及Stathmin亚细胞定位的影响 | 第66-67页 |
| 3.3.3 KIAA1199通过PP2A/Stathmin途径促进结肠癌细胞转移 | 第67-69页 |
| 3.3.4 临床资料分析KIAA1199与磷酸化Stathmin (Ser-16)蛋白表达的相关性 | 第69-71页 |
| 3.3.5 KIAA1199对结肠癌细胞微管稳定性的影响 | 第71-73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-74页 |
| 3.5 小结 | 第74-75页 |
| 第四部分: 在体内外水平验证紫杉醇抑制KIAA1199促进结肠癌细胞转移的作用 | 第75-92页 |
| 4.1 前言 | 第75-76页 |
| 4.2 材料与方法 | 第76-82页 |
| 4.2.1 实验仪器与耗材 | 第76-77页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第77-78页 |
| 4.2.3 细胞的复苏 | 第78页 |
| 4.2.4 细胞传代 | 第78-79页 |
| 4.2.5 构建稳定细胞株(KIAA1199稳定表达细胞株) | 第79页 |
| 4.2.6 流式细胞仪(FACS)检测GFP(+)细胞率 | 第79页 |
| 4.2.7 免疫印迹(Western blot) | 第79-80页 |
| 4.2.8 增殖实验(CCK-8) | 第80页 |
| 4.2.9 Transwell迁移侵袭实验 | 第80-81页 |
| 4.2.10 划痕实验 | 第81页 |
| 4.2.11 构建原位结肠癌模型 | 第81-82页 |
| 4.2.12 免疫组化(IHC) | 第82页 |
| 4.2.13 统计学分析 | 第82页 |
| 4.3 实验结果 | 第82-91页 |
| 4.3.1 构建KIAA1199稳定表达细胞株 | 第82-83页 |
| 4.3.2 紫杉醇对KIAA1199促进结肠癌细胞转移的影响 | 第83-86页 |
| 4.3.3 紫杉醇对KIAA1199促进小鼠原位结肠癌转移的影响 | 第86-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91页 |
| 4.5 小结 | 第91-92页 |
| 总结及展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 综述 | 第104-126页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 附录 攻读博士学位期间发表的论文 | 第128页 |
