| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 呼肠孤病毒科简介 | 第15-16页 |
| 2 水生动物呼肠孤病毒研究概况 | 第16-18页 |
| 3 锯缘青蟹病毒性疾病 | 第18-19页 |
| 4 病毒基因测定方法 | 第19-21页 |
| 5 水产动物病毒病分子生物学检测技术 | 第21-27页 |
| 5.1 核酸杂交技术 | 第21-22页 |
| 5.2 聚合酶链反应技术 | 第22-23页 |
| 5.3 基因芯片技术 | 第23页 |
| 5.4 环介导的等温扩增技术 | 第23-27页 |
| 6 本论文研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 第2章 感染呼肠孤病毒的锯缘青蟹组织病理观察及病毒纯化 | 第29-44页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-32页 |
| 2.1 实验动物 | 第29页 |
| 2.2 工具酶及试剂 | 第29页 |
| 2.3 常用缓冲液及试剂配制 | 第29-30页 |
| 2.4 光镜样品制备及观察 | 第30页 |
| 2.5 电镜样品制备及观察 | 第30页 |
| 2.6 病毒粒子纯化与负染观察 | 第30-31页 |
| 2.7 RNA提取 | 第31页 |
| 2.8 核酸的PAGE电泳 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-41页 |
| 3.1 肉眼观察 | 第32页 |
| 3.2 石蜡切片观察 | 第32-36页 |
| 3.3 超薄切片观察 | 第36-39页 |
| 3.4 负染结果观察 | 第39-40页 |
| 3.5 核酸电泳图谱分析 | 第40-41页 |
| 3.6 核酸特性分析 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 第3章 锯缘青蟹呼肠孤病毒部分基因序列的测定 | 第44-70页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-49页 |
| 2.1 病毒、质粒及载体 | 第44页 |
| 2.2 工具酶及试剂 | 第44-45页 |
| 2.3 常用缓冲液及试剂配制 | 第45页 |
| 2.4 引物设计 | 第45页 |
| 2.5 SsRV病毒基因的克隆 | 第45-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-67页 |
| 3.1 SsRV获得扩增序列的节段 | 第49-50页 |
| 3.2 SsRV病毒核苷酸序列分析 | 第50-54页 |
| 3.3 SsRV病毒RdRp系统进化分析 | 第54-56页 |
| 3.4 SsRV病毒基因组密码子偏爱性分析 | 第56-58页 |
| 3.5 SsRV病毒基因推导氨基酸序列分析 | 第58-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 第4章 锯缘青蟹呼肠孤病毒部分基因的原核表达 | 第70-85页 |
| 1 前言 | 第70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-78页 |
| 2.1 菌株及质粒 | 第70页 |
| 2.2 工具酶及试剂 | 第70-71页 |
| 2.3 常用缓冲液及试剂配制 | 第71页 |
| 2.4 引物设计 | 第71页 |
| 2.5 碱裂解法小量提取重组质粒 | 第71-72页 |
| 2.6 BL21感受态细胞的制备 | 第72页 |
| 2.7 构建ORF的原核表达载体 | 第72-74页 |
| 2.8 ORF重组蛋白的表达和纯化 | 第74-76页 |
| 2.9 SsRV多克隆抗体制备 | 第76-77页 |
| 2.10 Western免疫印迹检测ORF表达蛋白 | 第77-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-83页 |
| 3.1 ORF的原核表达载体的构建 | 第78页 |
| 3.2 表达体系的优化 | 第78-80页 |
| 3.3 ORF的原核表达蛋白的纯化 | 第80-81页 |
| 3.4 SsRV多克隆抗体制备 | 第81-82页 |
| 3.5 表达蛋白Western-blot鉴定 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 第5章 锯缘青蟹呼肠孤病毒RT-LAMP检测方法的建立 | 第85-101页 |
| 1 前言 | 第85-86页 |
| 2 材料与方法 | 第86-90页 |
| 2.1 病毒来源 | 第86页 |
| 2.2 工具酶及试剂 | 第86页 |
| 2.3 常用缓冲液及试剂配制 | 第86页 |
| 2.4 引物设计 | 第86页 |
| 2.5 SsRV dsRNA的提取 | 第86-87页 |
| 2.6 RT-LAMP反应体系的建立 | 第87-88页 |
| 2.7 RT-LAMP和RT-PCR检测灵敏度的对比 | 第88页 |
| 2.8 RT-LAMP方法的应用 | 第88-90页 |
| 3 结果和分析 | 第90-97页 |
| 3.1 RT-LAMP反应体系的设置 | 第90页 |
| 3.2 RT-LAMP最佳反应时间的确定 | 第90-91页 |
| 3.3 RT-LAMP最佳反应温度的确定 | 第91页 |
| 3.4 RT-LAMP反应体系最佳参数的确定 | 第91-95页 |
| 3.5 RT-LAMP特异性分析 | 第95-96页 |
| 3.6 RT-LAMP和RT-PCR检测灵敏度的对比 | 第96页 |
| 3.7 RT-LAMP方法的应用 | 第96-97页 |
| 4 讨论 | 第97-101页 |
| 4.1 引物设计与特异性 | 第97页 |
| 4.2 SsRV RT-LAMP的设置与体系优化 | 第97-99页 |
| 4.3 SsRV RT-LAMP的灵敏性 | 第99页 |
| 4.4 LAMP用于SsRV检测的意义 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 附录1 | 第111-113页 |
| 附录2 | 第113-117页 |
| 附录3 | 第117-121页 |
| 附录4 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
