| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 课题的提出 | 第11-12页 |
| 1.2 前人研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 植物体细胞胚发生研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.2 植物microRNA研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.3 柑橘microRNA研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.4 研究microRNA的方法 | 第18-19页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 转化受体材料 | 第19-20页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 实验所用培养基 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 柑橘基因组DNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 PCR扩增Csi-miR390、156前体基因序列 | 第21-22页 |
| 2.2.3 PCR产物的TA克隆 | 第22页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第22页 |
| 2.2.5 质粒DNA双酶切 | 第22-23页 |
| 2.2.6 酶切产物回收 | 第23页 |
| 2.2.7 重组质粒转化大肠杆菌及验证 | 第23页 |
| 2.2.8 重组质粒转化农杆菌 | 第23页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的遗传转化 | 第23-24页 |
| 2.2.10 GUS染色 | 第24页 |
| 2.2.11 抗性愈伤DNA提取 | 第24页 |
| 2.2.12 抗性愈伤的PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.2.13 植物总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.14 cDNA第一链合成 | 第26页 |
| 2.2.15 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.16 茎环反转录实时荧光定量PCR | 第27-29页 |
| 2.2.17 透射电镜观察 | 第29页 |
| 2.2.18 抗性愈伤体细胞胚发生诱导 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-44页 |
| 3.1 柑橘MIR390、156基因序列分析 | 第29-31页 |
| 3.2 Csi-miR390、156植物超量表达载体构建 | 第31-33页 |
| 3.3 农杆菌介导的遗传转化 | 第33-44页 |
| 3.3.1 转化愈伤的再生 | 第33-34页 |
| 3.3.2 抗性愈伤系的筛选 | 第34页 |
| 3.3.3 GUS染色检测 | 第34页 |
| 3.3.4 抗性愈伤PCR检测 | 第34-35页 |
| 3.3.5 Csi-MIR390、156 qRT-PCR | 第35-36页 |
| 3.3.6 Csi-miR390、156茎环qRT-PCR | 第36-37页 |
| 3.3.7 Csi-miR390、156靶基因qRT-PCR验证 | 第37-40页 |
| 3.3.8 超表达系体细胞胚发生初步诱导结果 | 第40-42页 |
| 3.3.9 超表达系透射电镜观察 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 miR156与植物胚胎发育及体细胞胚发生的关系 | 第44-45页 |
| 4.2 miR390与植物胚胎发育及体细胞胚发生的关系 | 第45-46页 |
| 4.3 总结与展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
