| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第13-40页 |
| 1.1 背腹轴形成的分子机制 | 第13-15页 |
| 1.1.1 组织者的形成 | 第13-15页 |
| 1.1.2 腹部极性的形成也由母源因子主动调控 | 第15页 |
| 1.2 胚层分化与中胚层诱导的分子机制 | 第15-18页 |
| 1.2.1 胚层分化 | 第15-16页 |
| 1.2.2 中胚层诱导 | 第16-18页 |
| 1.3 中胚层的背腹区域图式形成 | 第18-20页 |
| 1.4 Wnt8a协同Bmp2b信号途径维持斑马鱼胚胎腹部的特性 | 第20-22页 |
| 1.4.1 Bmp2b在维持斑马鱼腹部特性中的作用 | 第20-21页 |
| 1.4.2 Wnt8通过激活vox/vent/ved以维持斑马鱼腹部的特性 | 第21-22页 |
| 1.5 轴和轴旁中胚层图式形成的调控机制尚不清楚 | 第22-24页 |
| 1.6 斑马鱼轴和轴旁中胚层特化基因的控制机制 | 第24-29页 |
| 1.6.1 Spadetail(Spt)在轴和轴旁中胚层分化中的作用 | 第24-26页 |
| 1.6.2 spt通过直接激活papc来影响细胞运动 | 第26-27页 |
| 1.6.3 flh能够抑制spt在轴中胚层的异位表达 | 第27-28页 |
| 1.6.4 ntl能够维持原肠期flh的表达 | 第28页 |
| 1.6.5 flh,spt之间的关系 | 第28-29页 |
| 1.7 vsx1的结构特性及其在胚胎发育过程中的作用 | 第29-38页 |
| 1.7.1 同源异型框基因的分类以及功能 | 第29-35页 |
| 1.7.2 Vsx1的结构特性 | 第35-36页 |
| 1.7.3 CVC结构域 | 第36页 |
| 1.7.4 斑马鱼vsx1的表达模式 | 第36-37页 |
| 1.7.5 vsx1的功能 | 第37-38页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第38-40页 |
| 第二章 母源Vsx1影响胚胎早期形体模式形成 | 第40-57页 |
| 2.1 前言 | 第40页 |
| 2.2 材料和方法 | 第40-52页 |
| 2.2.1 溶液和试剂的配制 | 第40-42页 |
| 2.2.2 斑马鱼胚胎获取 | 第42页 |
| 2.2.3 斑马鱼胚胎脱膜处理 | 第42页 |
| 2.2.4 斑马鱼胚胎不同发育时期材料的获取 | 第42-43页 |
| 2.2.5 PCS107+vsx1载体的构建 | 第43-47页 |
| 2.2.6 Vsx1抗体的制备和检测 | 第47-50页 |
| 2.2.7 vsx1的在早期胚胎中的定位分析 | 第50-52页 |
| 2.3 实验结果 | 第52-55页 |
| 2.3.1 Vsx1抗体特异性 | 第52-53页 |
| 2.3.2 vsx1早期表达的定位 | 第53-55页 |
| 2.4 实验小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 母源Vsx1是轴旁中胚层特化所必需的转录调控因子 | 第57-74页 |
| 3.1 前言 | 第57-58页 |
| 3.2 材料和方法 | 第58-65页 |
| 3.2.1 溶液和试剂的配制 | 第58页 |
| 3.2.2 vsx1 sbMO的设计 | 第58页 |
| 3.2.3 重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| 3.2.4 体外转录capped mRNA | 第60-62页 |
| 3.2.5 反义RNA探针的制备 | 第62-63页 |
| 3.2.6 显微注射 | 第63页 |
| 3.2.7 整胚原位杂交 | 第63-65页 |
| 3.3 实验结果 | 第65-72页 |
| 3.3.1 母源vsx1 mRNA影响早期胚胎发育 | 第65-68页 |
| 3.3.2 母源Vsx1参与轴和轴旁中胚层细胞命运的决定 | 第68-69页 |
| 3.3.3 母源Vsx1启动轴旁中胚层特化 | 第69-70页 |
| 3.3.4 母源vsx1在调控flh,spt表达模式中的作用 | 第70-71页 |
| 3.3.5 Vsx1不影响Wnt8和Bmp2b信号通路 | 第71-72页 |
| 3.4 实验小结与讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 Vsx1是转录抑制因子 | 第74-81页 |
| 4.1 前言 | 第74-75页 |
| 4.2 材料和方法 | 第75-78页 |
| 4.2.1 溶液和试剂的配制 | 第75页 |
| 4.2.2 重组En-vsx1和VP16-vsx1 | 第75-76页 |
| 4.2.3 体外转录 | 第76页 |
| 4.2.4 显微注射 | 第76页 |
| 4.2.5 原位杂交 | 第76页 |
| 4.2.6 qRT-PCR分析 | 第76-78页 |
| 4.3 实验结果 | 第78-80页 |
| 4.3.1 En-Vsx1和VP16-Vsx1的构建 | 第78页 |
| 4.3.2 En-Vsx1和VP16-Vsx1对发育和内源flh表达的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.3 En-Vsx1和VP16-Vsx1对靶基因转录影响的定量分析 | 第79-80页 |
| 4.4 实验小结与讨论 | 第80-81页 |
| 第五章 Vsx1在DNA上结合位点的序列特性和识别功能域 | 第81-112页 |
| 5.1 前言 | 第81-82页 |
| 5.2 材料和方法 | 第82-98页 |
| 5.2.1 溶液和试剂的配制 | 第82-83页 |
| 5.2.2 斑马鱼基因组DNA的提取 | 第83-84页 |
| 5.2.3 构建GFP报告基因 | 第84-85页 |
| 5.2.4 显微注射 | 第85-86页 |
| 5.2.5 qRT-PCR定量分析Vsx1对gfp表达丰度的影响 | 第86页 |
| 5.2.6 构建表达载体 | 第86-87页 |
| 5.2.7 融合蛋白的表达以及纯化 | 第87-91页 |
| 5.2.8 凝胶阻滞实验的原理和方法 | 第91-94页 |
| 5.2.9 染色质免疫共沉淀 | 第94-98页 |
| 5.2.10 突变HD以及CVC结构域 | 第98页 |
| 5.3 实验结果 | 第98-110页 |
| 5.3.1 Vsx1特异性结合位点的序列特性 | 第98-100页 |
| 5.3.2 其他序列元件参与了Vsx1与靶基因特异性结合位点的识别 | 第100-102页 |
| 5.3.3 Vsx1能够结合到ntl启动子上具有相似序列特性的位点 | 第102-104页 |
| 5.3.4 vsx1 CVC区域的克隆以及序列优化 | 第104-105页 |
| 5.3.5 体外表达GST+CVC结构域 | 第105-106页 |
| 5.3.6 GST+CVC融合蛋白的纯化以及浓度测定 | 第106页 |
| 5.3.7 GST+CVC融合蛋白的鉴定 | 第106-107页 |
| 5.3.8 Vsx1的HD和CVC结构域突变都不能再抑制靶基因的表达 | 第107-108页 |
| 5.3.9 Vsx1的HD和CVC结构域突变都导致其不能与靶基因结合 | 第108-109页 |
| 5.3.10 Vsx1的CVC结构域不能在体外与结合位点直接结合 | 第109-110页 |
| 5.4 实验小结与讨论 | 第110-112页 |
| 第六章 主要结果,结论和进一步的研究设想 | 第112-114页 |
| 6.1 主要研究结果和结论 | 第112-113页 |
| 6.2 进一步研究设想 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-121页 |
