| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 工业中常用的面粉增筋剂 | 第12-14页 |
| 1.2.1 酶制剂类增筋剂 | 第12-13页 |
| 1.2.2 化学类面粉增筋剂 | 第13-14页 |
| 1.3 蛋白质二硫键异构酶的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 PDI的来源 | 第14-15页 |
| 1.3.2 PDI的结构特征 | 第15-16页 |
| 1.4 PDI的功能特性 | 第16-18页 |
| 1.4.1 PDI催化二硫键的形成与异构 | 第16-17页 |
| 1.4.2 PDI的分子伴侣活性 | 第17页 |
| 1.4.3 PDI的其它功能 | 第17-18页 |
| 1.5 PDI的克隆表达 | 第18页 |
| 1.6 关于PDI应用的研究 | 第18-19页 |
| 1.6.1 在基因工程中的应用 | 第18页 |
| 1.6.2 PDI的工业应用探索 | 第18-19页 |
| 1.7 大肠杆菌表达系统 | 第19-20页 |
| 1.8 本论文的重要意义及主要研究内容 | 第20-22页 |
| 1.8.1 研究意义 | 第20页 |
| 1.8.2 主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 重组wPDI原核表达载体的构建 | 第22-38页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 主要生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第23页 |
| 2.2.4 常用培养基及试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2.5 大肠杆菌DH5α、BL21（DE3）、C43（DE3）感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 小麦黄化苗叶片总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 反转录PCR | 第25-26页 |
| 2.3.3 回收及纯化wdpi的PCR产物 | 第26页 |
| 2.3.4 wpdi的PCR产物加A尾及回收纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.5 构建wpdi的重组克隆载体 | 第27-28页 |
| 2.3.6 wPDI原核表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-37页 |
| 2.4.1 小麦黄化苗总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.4.2 反转录PCR扩增wpdi的目的基因 | 第31-32页 |
| 2.4.3 wpdi基因的克隆载体的构建 | 第32页 |
| 2.4.4 克隆wpdi基因的序列比对 | 第32-33页 |
| 2.4.5 wPDI氨基酸序列分析 | 第33-35页 |
| 2.4.6 wPDI表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组wPDI的表达与纯化 | 第38-56页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第38-41页 |
| 3.2.1 主要试剂材料 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第39页 |
| 3.2.3 常用溶液的配制 | 第39-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-48页 |
| 3.3.1 重组表达菌株的构建 | 第41页 |
| 3.3.2 重组wPDI的小量诱导表达 | 第41页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE | 第41-42页 |
| 3.3.4 Western-blot | 第42-44页 |
| 3.3.5 表达条件优化 | 第44页 |
| 3.3.6 发酵培养 | 第44-45页 |
| 3.3.7 重组wPDI的可溶性分析 | 第45-46页 |
| 3.3.8 亲和层析 | 第46-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 3.4.1 重组表达菌株的构建及诱导表达 | 第48-49页 |
| 3.4.2 Western-blot鉴定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 诱导条件的优化 | 第50-52页 |
| 3.4.4 重组wPDI的可溶性分析 | 第52-53页 |
| 3.4.5 亲和层析纯化重组wPDI | 第53-55页 |
| 3.4.6 目的蛋白浓缩除盐 | 第55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 重组wPDI的酶学性质研究 | 第56-67页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 主要试剂及材料 | 第57页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第57页 |
| 4.2.3 溶液的配制 | 第57-58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 重组wPDI的异构酶活性 | 第58-59页 |
| 4.3.2 重组wPDI的还原酶活性 | 第59页 |
| 4.3.3 重组wPDI还原反应的最适反应温度和最适反应pH | 第59-60页 |
| 4.3.4 重组wPDI温度稳定性和pH稳定性研究 | 第60页 |
| 4.3.5 重组wPDI的分子伴侣活性 | 第60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-66页 |
| 4.4.1 重组wPDI的异构酶活性 | 第60-61页 |
| 4.4.2 重组wPDI的还原酶活性 | 第61-65页 |
| 4.4.2.1 重组wPDI的最适添加量 | 第61-62页 |
| 4.4.2.2 重组wPDI还原反应的最适pH | 第62-63页 |
| 4.4.2.3 重组wPDI还原反应的最适温度 | 第63页 |
| 4.4.2.4 重组wPDI的最适反应时间 | 第63-64页 |
| 4.4.2.5 重组wPDI的pH稳定性 | 第64-65页 |
| 4.4.2.6 重组wPDI的温度稳定性 | 第65页 |
| 4.4.3 重组wPDI的分子伴侣活性 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 重组wPDI对小麦面粉品质的影响 | 第67-78页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 5.2.1 主要材料 | 第67-68页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第68页 |
| 5.3 实验方法 | 第68-69页 |
| 5.3.1 重组wPDI对面粉粉质特性的影响 | 第68页 |
| 5.3.2 重组wPDI的面包烘焙实验 | 第68-69页 |
| 5.3.3 面包芯质构分析 | 第69页 |
| 5.3.4 数据分析 | 第69页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第69-76页 |
| 5.4.1 重组wPDI对面粉粉质特性的影响 | 第69-74页 |
| 5.4.2 重组wPDI对面包烘焙品质的影响 | 第74-76页 |
| 5.5 本章小结 | 第76-78页 |
| 结论与展望 | 第78-80页 |
| 一、结论 | 第78页 |
| 二、研究创新点 | 第78-79页 |
| 三、展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附件 | 第90页 |
