| 摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-18页 |
| 1.1 核黄素的生物合成及调控 | 第7-11页 |
| 1.1.1 B.subtilis核黄素合成途径 | 第7-8页 |
| 1.1.2 ribC操纵子的结构和功能 | 第8-11页 |
| 1.2 ribC基因与 FMN 和 FAD 的生物合成 | 第11-12页 |
| 1.3 ribC操纵子和 ribC基因的修饰与核黄素的过量合成 | 第12-13页 |
| 1.3.1 ribC操纵子与核黄素过量合成的关系 | 第12-13页 |
| 1.3.2 ribC基因与核黄素过量合成的关系 | 第13页 |
| 1.4 B.subtilismRNA 稳定子的稳定机制 | 第13-17页 |
| 1.4.1 5'端核糖体的结合或滞留 | 第14-15页 |
| 1.4.2 5'端茎环结构的存在 | 第15-16页 |
| 1.4.3 asnH mRNA 稳定子 | 第16-17页 |
| 1.5 本文的研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 B.subtilis染色体 DNA 提取 | 第26页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.4 融合 PCR | 第28-31页 |
| 2.2.5 PCR产物的胶回收 | 第31页 |
| 2.2.6 PCR产物的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.7 DNA 的酶切和连接 | 第32页 |
| 2.2.8 E.coli 感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.9 E.coli 感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 2.2.10 B.subtilis 24 A1 原生质体的制备与转化 | 第33-34页 |
| 2.2.11 B.subtilis的 Spizizen 转化 | 第34页 |
| 2.2.12 细菌总 RNA 的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.13 cDNA 的合成 | 第35-36页 |
| 2.2.14 实时荧光定量 PCR | 第36页 |
| 2.2.15 2~(-ΔΔCt)法计算基因的相对表达量 | 第36-37页 |
| 2.2.16 核黄素产量的测定 | 第37页 |
| 2.2.17 菌种的保藏 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-63页 |
| 3.1 B.subtilis24A 1 基因重组能力的验证 | 第38-44页 |
| 3.1.1 质粒 pC194 转化菌株 24 A1 | 第38-39页 |
| 3.1.2 片段 UR-P_(ara)-neo -D R 转化菌株 24 A1 | 第39-40页 |
| 3.1.3 片段 UR-P_(ara)- neo -D R- A 转化菌株 24 A1 | 第40-42页 |
| 3.1.4 重组质粒 pUC18-N 转化菌株 24A | 第42-44页 |
| 3.2 核黄素缺陷菌株的构建 | 第44-47页 |
| 3.2.1 重组质粒 pUC18-Δrib 的构建 | 第44-47页 |
| 3.2.2 转化及核黄素缺陷株的筛选 | 第47页 |
| 3.3 ribC操纵子表达元件的修饰 | 第47-54页 |
| 3.3.1 ribC操纵子表达元件的修饰方案 | 第48页 |
| 3.3.2 gsiB mRNA 稳定子修饰 ribC操纵子 | 第48-50页 |
| 3.3.3 asnH mRNA 稳定子修饰 ribC操纵子 | 第50-53页 |
| 3.3.4 ribC操纵子修饰效果的评估 | 第53-54页 |
| 3.4 ribC基因的点突变及表型效应 | 第54-63页 |
| 3.4.1 B.subtilis24 A1 ribC基因序列测序 | 第55页 |
| 3.4.2 重组质粒 pUC18-bRCe 的构建 | 第55-57页 |
| 3.4.3 重组质粒 pUC18-hREb-bRCe 的构建 | 第57-59页 |
| 3.4.4 转化和 ribC基因点突变株的筛选 | 第59-60页 |
| 3.4.5 ribC基因点突变株的表型效应 | 第60-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 4.1 主要结论 | 第63页 |
| 4.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-76页 |
