| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 组织蛋白酶概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 组织蛋白酶的性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 组织蛋白酶的合成加工 | 第12页 |
| 1.1.3 组织蛋白酶的表达调控 | 第12页 |
| 1.1.4 组织蛋白酶的结构特征及催化机制 | 第12-14页 |
| 1.1.5 组织蛋白酶的生理功能及病理作用 | 第14-15页 |
| 1.1.6 组织蛋白酶抑制剂 | 第15-16页 |
| 1.2 CTSB 的性质及其对卵母细胞成熟及胚胎发育的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.1 CTSB 的生物学特性 | 第16页 |
| 1.2.2 CTSB 对卵母细胞及胚胎发育的作用研究 | 第16-17页 |
| 1.2.3 绵羊 CTSB 相关研究 | 第17页 |
| 1.3 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 E-64 的性质及应用 | 第17-20页 |
| 1.3.1 E-64 的结构及性质 | 第17-18页 |
| 1.3.2 E-64 的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 E-64 提高胚胎体外发育能力的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究拟解决的关键技术问题及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第22-24页 |
| 2.1.4 主要分子生物学分析工具 | 第24页 |
| 2.2 绵羊 CTSB 基因 CDS 序列克隆方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取和检测 | 第24-25页 |
| 2.2.2 反转录合成 cDNA | 第25-26页 |
| 2.2.3 PCR 反应 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PCR 产物的纯化与回收 | 第27页 |
| 2.2.5 目的基因的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.3 绵羊 COCS 中 CTSB 活性与卵母细胞发育能力相关性研究方法 | 第29-31页 |
| 2.3.1 绵羊 COCs 的采集 | 第29页 |
| 2.3.2 卵母细胞的体外成熟 | 第29页 |
| 2.3.3 卵母细胞孤雌激活及胚胎发育培养 | 第29页 |
| 2.3.4 囊胚细胞荧光染色 | 第29-30页 |
| 2.3.5 COCs 中 CTSB 活性测定 | 第30-31页 |
| 2.4 试验设计 | 第31-33页 |
| 2.4.1 绵羊 CTSB 基因 CDS 序列克隆 | 第31页 |
| 2.4.2 CTSB 活性与卵母细胞发育能力相关性研究试验分组 | 第31页 |
| 2.4.3 绵羊 COCs 体外成熟过程中 CTSB 活性变化规律 | 第31页 |
| 2.4.4 成熟液中添加不同浓度 E-64 对绵羊 COCs 中 CTSB 活性的影响 | 第31页 |
| 2.4.5 绵羊卵母细胞及卵丘细胞中 CTSB 活性变化及 E-64 对其的影响 | 第31页 |
| 2.4.6 成熟液中添加不同浓度 E-64 对成年绵羊卵母细胞体外成熟的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.7 成熟液中添加不同浓度 E-64 对成年绵羊卵母细胞孤雌激活后胚胎发育能力的影响 | 第32页 |
| 2.4.8 不同质量 COCs 体外成熟后 CTSB 活性的差异 | 第32页 |
| 2.4.9 数据分析 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-51页 |
| 3.1 绵羊 CTSB 基因 CDS 序列克隆及生物信息学分析 | 第33-44页 |
| 3.1.1 总 RNA 提取 | 第33页 |
| 3.1.2 CTSB 基因扩增 | 第33-34页 |
| 3.1.3 测序鉴定 | 第34页 |
| 3.1.4 生物信息学分析 | 第34-44页 |
| 3.2 绵羊 COCS 中 CTSB 活性与卵母细胞发育能力相关性研究结果 | 第44-51页 |
| 3.2.1 绵羊 COCs 体外成熟过程中 CTSB 活性变化规律 | 第44-45页 |
| 3.2.2 体外成熟后卵母细胞及卵丘细胞中 CTSB 活性的变化 | 第45-46页 |
| 3.2.3 不同质量 COCs 体外成熟后卵母细胞及卵丘细胞中 CTSB 活性差异比较 | 第46-48页 |
| 3.2.4 不同浓度 E-64 对绵羊 COCs 中 CTSB 活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.5 不同浓度 E-64 对卵母细胞及卵丘细胞中 CTSB 活性的影响 | 第49页 |
| 3.2.6 不同浓度 E-64 对成年绵羊卵母细胞体外成熟效果的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.7 不同浓度 E-64 对成年绵羊卵母细胞孤雌激活后胚胎发育能力的影响 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 绵羊 CTSB 基因 CDS 序列克隆及生物信息学分析 | 第51-53页 |
| 4.1.1 扩增序列的准确性分析 | 第51页 |
| 4.1.2 CTSB 同源性分析 | 第51页 |
| 4.1.3 CTSB 蛋白质结构预测与分析 | 第51-52页 |
| 4.1.4 生物信息学分析的准确性 | 第52-53页 |
| 4.2 绵羊 COCS 中 CTSB 活性与卵母细胞发育能力相关性研究 | 第53-56页 |
| 4.2.1 绵羊 COCs 体外成熟过程中 CTSB 活性变化规律 | 第53-54页 |
| 4.2.2 成年绵羊及羔绵羊 COCs 中 CTSB 活性的差异 | 第54页 |
| 4.2.3 不同浓度 E-64 对绵羊 COCs 体外成熟过程中 CTSB 活性的抑制作用 | 第54页 |
| 4.2.4 不同浓度 E-64 对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 | 第54页 |
| 4.2.5 不同浓度 E-64 对绵羊孤雌激活胚胎发育能力的影响 | 第54-55页 |
| 4.2.6 不同质量 COCs 体外成熟后 CTSB 活性的差异 | 第55页 |
| 4.2.7 有待进一步研究的问题 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
