| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一章 动物病毒诱导细胞凋亡研究进展 | 第17-27页 |
| 1.1 细胞凋亡概述 | 第17-18页 |
| 1.2 动物病毒诱导宿主细胞凋亡 | 第18-22页 |
| 1.2.1 动物病毒诱导细胞凋亡的病理学意义 | 第18-19页 |
| 1.2.2 动物病毒诱导凋亡的信号转导机制 | 第19-22页 |
| 1.3 猪细小病毒的致病机制 | 第22-24页 |
| 1.4 病毒与胎盘滋养层细胞的相互作用关系 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第25-27页 |
| 第二章 PPV诱导PK-15 细胞凋亡的信号转导机制 | 第27-41页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 毒种和细胞株 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 PPV的增殖 | 第28页 |
| 2.2.2 PPV的TCID50值测定 | 第28页 |
| 2.2.3 MTT比色法检测PPV感染的PK-15 细胞存活率 | 第28-29页 |
| 2.2.4 AO/EB染色观察PPV感染PK-15 细胞的形态学变化 | 第29页 |
| 2.2.5 DNA片断化分析法检测PPV感染的PK-15 细胞基因组 | 第29页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测PPV感染的PK-15 细胞凋亡率 | 第29-30页 |
| 2.2.7 分光光度法检测PPV感染的PK-15 细胞Caspase活性 | 第30页 |
| 2.2.8 western blotting检测PPV感染的PK-15 细胞中凋亡相关因子 | 第30-31页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-39页 |
| 2.3.1 PPV降低PK-15 细胞的存活率 | 第31-32页 |
| 2.3.2 PPV诱导PK-15 细胞凋亡形态学变化 | 第32-33页 |
| 2.3.3 PPV诱导PK-15 细胞的DNA片段化降解 | 第33-34页 |
| 2.3.4 PPV促进PK-15 细胞凋亡率的增加 | 第34页 |
| 2.3.5 PPV促进PK-15 细胞内Caspase的级联活化反应 | 第34-35页 |
| 2.3.6 PPV引起PK-15 细胞内PARP降解 | 第35-36页 |
| 2.3.7 PPV对PK-15 细胞不激活Fas/Fas L介导的死亡受体通路 | 第36页 |
| 2.3.8 PPV感染调控PK-15 细胞内Bax和Bcl-2 的表达 | 第36-37页 |
| 2.3.9 PPV促进PK-15 细胞内Bax转位和Cyt c释放 | 第37页 |
| 2.3.10 PPV促进p53活化和磷酸化修饰 | 第37-38页 |
| 2.3.11 p53参与介导PPV感染的PK-15 细胞中Bax和Bcl-2 表达 | 第38页 |
| 2.3.12 p53参与调控PPV对PK-15 细胞线粒体通路的激活 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 永生化猪胎盘滋养层细胞系的建立及生物学特性分析 | 第41-58页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 组织和试验动物 | 第41页 |
| 3.1.2 菌种和细胞 | 第41页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 原代猪胎盘滋养层细胞的分离与纯化 | 第42页 |
| 3.2.2 免疫细胞化学染色鉴定原代猪胎盘滋养层细胞 | 第42页 |
| 3.2.3 p CI-neo-h TERT质粒转染原代猪胎盘滋养层细胞 | 第42-43页 |
| 3.2.4 RT-PCR检测猪胎盘滋养层细胞中外源性h TERT的表达 | 第43页 |
| 3.2.5 细胞免疫荧光染色鉴定猪胎盘滋养层细胞 | 第43-44页 |
| 3.2.6 MTT法检测猪胎盘滋养层细胞的生长特性 | 第44页 |
| 3.2.7 猪胎盘滋养层细胞的非显带染色体核型分析 | 第44页 |
| 3.2.8 永生化猪胎盘滋养层细胞的致瘤性试验 | 第44页 |
| 3.2.9 透射电镜观察猪胎盘滋养层细胞的极化特性 | 第44-45页 |
| 3.2.10 放射性免疫技术检测猪胎盘滋养层细胞的激素分泌功能 | 第45页 |
| 3.2.11 western blotting检测猪胎盘滋养层细胞中E-钙黏素的表达 | 第45页 |
| 3.2.12 统计学分析 | 第45页 |
| 3.3 结果 | 第45-55页 |
| 3.3.1 原代猪胎盘滋养层细胞的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 永生化猪胎盘滋养层细胞系的建立 | 第46-47页 |
| 3.3.3 h TERT基因在猪胎盘滋养层细胞中的表达 | 第47页 |
| 3.3.4 h TERT在猪胎盘滋养层细胞中的表达促进细胞的增殖 | 第47-49页 |
| 3.3.5 永生化猪胎盘滋养层细胞保持正常核型 | 第49-50页 |
| 3.3.6 永生化猪胎盘滋养层细胞不具有悬浮生长特性 | 第50页 |
| 3.3.7 永生化猪胎盘滋养层细胞不具有裸鼠致瘤性 | 第50-51页 |
| 3.3.8 永生化猪胎盘滋养层细胞的细胞极性 | 第51-53页 |
| 3.3.9 永生化猪胎盘滋养层细胞特异性标记分子的表达 | 第53-54页 |
| 3.3.10 E-钙粘素在猪胎盘滋养层细胞中的表达 | 第54页 |
| 3.3.11 MHC-I分子在猪胎盘滋养层细胞中的表达 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 PPV诱导猪胎盘滋养层细胞凋亡信号转导通路的研究 | 第58-70页 |
| 4.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.1 毒种和细胞株 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-60页 |
| 4.2.1 PCR技术检测PPV NS1基因在原代PTCs和h TERT-PTCs中的表达 | 第58-59页 |
| 4.2.2 细胞免疫荧光染色定位PPV在原代PTCs和h TERT-PTCs中分布 | 第59页 |
| 4.2.3 AO/EB染色观察PPV感染原代PTCs和h TERT-PTCs的形态学变化 | 第59页 |
| 4.2.4 DNA片断化分析法检测PPV感染原代PTCs和h TERT-PTCs的基因组 | 第59页 |
| 4.2.5 流式细胞术检测PPV感染原代PTCs和h TERT-PTCs的凋亡率 | 第59页 |
| 4.2.6 分光光度法检测PPV感染原代PTCs和h TERT-PTCs中Caspase活性 | 第59-60页 |
| 4.2.7 western blotting检测PPV感染原代PTCs和h TERT-PTCs中凋亡相关因子的表达 | 第60页 |
| 4.2.8 统计学分析 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-67页 |
| 4.3.1 PPV在原代PTCs和h TERT-PTCs内的感染特性 | 第60-61页 |
| 4.3.2 PPV NS1基因在原代PTCs和h TERT-PTCs内的表达 | 第61页 |
| 4.3.3 PPV感染原代PTCs和h TERT-PTCs诱导细胞凋亡形态学变化 | 第61-62页 |
| 4.3.4 PPV诱导原代PTCs和h TERT-PTCs的DNA片段化降解 | 第62页 |
| 4.3.5 PPV促进原代PTCs和h TERT-PTCs凋亡率增加 | 第62-63页 |
| 4.3.6 PPV促进原代PTCs和h TERT-PTCs的Caspase活化 | 第63-65页 |
| 4.3.7 PPV促进h TERT-PTCs的PARP降解 | 第65页 |
| 4.3.8 PPV激活原代PTCs和h TERT-PTCs的Fas/Fas L死亡受体通路 | 第65-66页 |
| 4.3.9 PPV激活原代PTCs和h TERT-PTCs的线粒体通路 | 第66页 |
| 4.3.10 PPV促进原代PTCs和h TERT-PTCs的p53积累和活化 | 第66-67页 |
| 4.3.11 p53参与调控Bax和Bcl-2 在原代PTCs和h TERT-PTCs中的表达 | 第67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-70页 |
| 第五章 动物试验 | 第70-75页 |
| 5.1 材料 | 第70页 |
| 5.1.1 试验动物及病毒 | 第70页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第70页 |
| 5.1.3 主要仪器与设备 | 第70页 |
| 5.2 方法 | 第70-71页 |
| 5.2.1 试验动物分组及处理 | 第70-71页 |
| 5.2.2 HE染色观察胎盘组织的病理学变化 | 第71页 |
| 5.2.3 DNA片断化法分析胎盘滋养层细胞内基因组的变化 | 第71页 |
| 5.2.4 western blotting检测胎盘滋养层细胞凋亡相关因子的表达 | 第71页 |
| 5.3 结果 | 第71-73页 |
| 5.3.1 PPV感染初孕母猪胎盘和胎儿的剖检变化 | 第71-72页 |
| 5.3.2 PPV引起的母猪胎盘组织病理学变化 | 第72-73页 |
| 5.3.3 PPV对母猪胎盘组织滋养层细胞凋亡的诱导 | 第73页 |
| 5.4 讨论 | 第73-74页 |
| 5.5 小结 | 第74-75页 |
| 结论与创新点 | 第75-76页 |
| 结论 | 第75页 |
| 创新点 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-93页 |
| 主要缩略词和中英文对照表（Abbreviation Index） | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 作者简介 | 第96-97页 |
