| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 引言 | 第9-14页 |
| 1. 树鼩基本介绍 | 第9页 |
| 2. 树鼩实验动物模型 | 第9-11页 |
| 2.1 感染性肝炎模型 | 第9-10页 |
| 2.2 肠道病毒感染模型 | 第10页 |
| 2.3 细菌感染模型 | 第10-11页 |
| 2.4 疾病研究模型 | 第11页 |
| 3. 树鼩CD4蛋白及其多克隆抗体制备检测 | 第11-12页 |
| 4. 选题目的及拟解决问题 | 第12-14页 |
| 第一章 树鼩CD4基因序列的生物信息学分析 | 第14-21页 |
| 1.1 材料 | 第14页 |
| 1.1.1 实验数据 | 第14页 |
| 1.1.2 实验常用的生物信息学软件 | 第14页 |
| 1.2 方法 | 第14-15页 |
| 1.2.1 CD4基因核酸序列生物信息学分析方法 | 第14页 |
| 1.2.2 CD4基因氨基酸序列生物信息学分析方法 | 第14-15页 |
| 1.3 结果 | 第15-20页 |
| 1.3.1 CD4基因稀有密码子分析 | 第15页 |
| 1.3.2 CD4基因氨基酸序列的分子特性 | 第15页 |
| 1.3.3 CD4基因氨基酸序列抗原表位预测 | 第15-16页 |
| 1.3.4 CD4基因氨基酸序列疏水性预测 | 第16页 |
| 1.3.5 CD4基因氨基酸序列跨膜区域的预测 | 第16-17页 |
| 1.3.6 CD4基因氨基酸序列信号肽的预测 | 第17页 |
| 1.3.7 CD4蛋白质理化性质 | 第17-19页 |
| 1.3.8 翻译后修饰位点 | 第19页 |
| 1.3.9 蛋白结构预测 | 第19-20页 |
| 1.4 讨论及展望 | 第20-21页 |
| 1.4.1 CD4基因序列的特征 | 第20页 |
| 1.4.2 CD4基因氨基酸序列的特征 | 第20-21页 |
| 第二章 树鼩CD4基因的克隆及表达载体构建 | 第21-36页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.5 试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 树鼩外周血淋巴细胞的分离与刺激培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 提取树鼩外周血淋巴细胞总RNA | 第24-25页 |
| 2.2.3 总RNA逆转录为cDNA | 第25页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR扩增CD4基因序列 | 第26页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.2.7 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第27页 |
| 2.2.8 纯化产物连接于pMD19-T载体 | 第27-28页 |
| 2.2.9 DH5α、BL21、BL21(DE3)、Rosetta(DE3)pLysS感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.10 转化感受态细胞DH5a | 第28页 |
| 2.2.11 阳性重组质粒的提取 | 第28-30页 |
| 2.2.12 酶切鉴定目的片段 | 第30页 |
| 2.2.13 原核表达载体的重组构建及双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.14 转化感受态细胞BL21、BL21(DE3)、Rosetta(DE3)pLysS | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-34页 |
| 2.3.1 不含信号肽的CD4基因片段的PCR扩增 | 第31页 |
| 2.3.2 PCR产物的胶回收 | 第31-32页 |
| 2.3.3 重组质粒pMD19-T的构建与双酶切鉴定及测序 | 第32-33页 |
| 2.3.4 原核表达载体的重组构建及双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.5 原核表达菌的获得 | 第34页 |
| 2.4 小结 | 第34页 |
| 2.5 讨论及展望 | 第34-36页 |
| 第三章 树鼩CD4蛋白的原核表达与纯化 | 第36-58页 |
| 3.1 材料 | 第36-40页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第36-40页 |
| 3.2 方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.2.2 蛋白表达条件探索 | 第41页 |
| 3.2.3 蛋白纯化 | 第41-43页 |
| 3.2.4 GST-CD4蛋白和His-CD4蛋白的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-55页 |
| 3.3.1 GST-CD4蛋白表达条件摸索及确定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 His-CD4蛋白表达条件摸索及确定(具体结果详见附录四) | 第45-51页 |
| 3.3.3 GST-CD4蛋白的纯化条件摸索及纯化 | 第51页 |
| 3.3.4 His-CD4蛋白的纯化条件摸索及纯化 | 第51-54页 |
| 3.3.5 GST-CD4蛋白和His-CD4蛋白的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4 小结 | 第55页 |
| 3.5 讨论及展望 | 第55-58页 |
| 第四章 树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测 | 第58-64页 |
| 4.1 材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第58页 |
| 4.1.2 蛋白及佐剂 | 第58页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.4 主要溶液配方 | 第58-59页 |
| 4.2 方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 CD4蛋白多克隆抗体的制备 | 第59页 |
| 4.2.2 间接ELISA法测定多克隆抗体效价 | 第59-60页 |
| 4.2.3 分析比较各组血清抗体效价 | 第60页 |
| 4.2.4 多克隆抗体的特异性检测 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-63页 |
| 4.3.1 血清抗体效价 | 第60-62页 |
| 4.3.2 血清抗体的特异性 | 第62-63页 |
| 4.4 小结 | 第63页 |
| 4.5 讨论及展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 附录一 CD4阳性样品测序序列 | 第67-70页 |
| 附录二 主要缩略词表 | 第70-71页 |
| 附录三 质谱结果 | 第71-76页 |
| 附录四 His-CD4蛋白表达条件摸索 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 研究生简历 | 第83-84页 |
