| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 奶牛乳腺发育与泌乳 | 第14页 |
| 1.2 奶牛乳蛋白合成机理 | 第14-15页 |
| 1.3 奶牛乳蛋白合成信号转导途径研究 | 第15-17页 |
| 1.3.1 JAK2-STAT5信号通路 | 第15-16页 |
| 1.3.2 mTOR信号通路 | 第16-17页 |
| 1.4 氨基酸对泌乳的调节作用 | 第17页 |
| 1.5 NF-κB相关研究 | 第17-19页 |
| 1.5.1 NF-κB的分类 | 第17-18页 |
| 1.5.2 NF-κB的功能研究 | 第18-19页 |
| 1.6 氨酰t RNA合成酶的功能研究 | 第19-21页 |
| 1.6.1 氨酰tRNA合成酶的结构与功能 | 第19-20页 |
| 1.6.2 甘氨酰t RNA合成酶相关研究 | 第20-21页 |
| 1.7 GCN2/e IF2α 途径相关研究 | 第21页 |
| 1.7.1 e IF2α 相关研究 | 第21页 |
| 1.7.2 GCN2相关研究 | 第21页 |
| 1.8 实验目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 | 第24页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第24-28页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的培养纯化与鉴定 | 第28-31页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的冻存 | 第31页 |
| 2.3 添加蛋氨酸的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第31-32页 |
| 2.4 添加蛋氨酸后乳腺上皮细胞中NFκB1和p-NFκB1的表达与亚细胞定位 | 第32页 |
| 2.4.1 IF法检测添加蛋氨酸后细胞中NFκB1和p-NFκB1的表达与亚细胞定位 | 第32页 |
| 2.4.2 WB法检测添加蛋氨酸后细胞中NFκB1和p-NFκB1的表达与亚细胞定位 | 第32页 |
| 2.5 不同氨基酸处理对磷酸化GlyRS蛋白表达水平上的影响 | 第32-33页 |
| 2.5.1 不同氨基酸处理对磷酸化GlyRS总蛋白表达水平上的影响 | 第32-33页 |
| 2.5.2 不同氨基酸对磷酸化GlyRS胞浆和胞核蛋白水平上的影响 | 第33页 |
| 2.6 免疫共沉淀分析NFκB1与GlyRS的相互作用 | 第33-34页 |
| 2.6.1 胞浆蛋白和胞核蛋白的提取与纯度鉴定 | 第33页 |
| 2.6.2 免疫共沉淀分析NFκB1与GlyRS的相互作用 | 第33-34页 |
| 2.7 p-GlyRS与GCN2/e IF2α 途径的关系研究 | 第34-38页 |
| 2.7.1 GlyRS过表达对GCN2/e IF2α 途径的影响 | 第34-37页 |
| 2.7.2 GlyRS抑制对GCN2/e IF2α 途径的影响 | 第37-38页 |
| 2.8 蛋白质翻译过程和mTOR途径对GlyRS磷酸化的影响 | 第38页 |
| 2.8.1 蛋白质翻译过程对GlyRS磷酸化的影响 | 第38页 |
| 2.8.2 mTOR途径对GlyRS磷酸化的影响 | 第38页 |
| 2.9 统计分析 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-57页 |
| 3.1 乳腺上皮细胞的原代培养、纯化及其鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.1 乳腺上皮细胞的原代培养、纯化 | 第40-41页 |
| 3.1.2 乳腺上皮细胞的鉴定 | 第41页 |
| 3.2 添加蛋氨酸的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第41-42页 |
| 3.3 添加蛋氨酸后乳腺上皮细胞中NFκB1和p-NFκB1的表达与亚细胞定位 | 第42-46页 |
| 3.3.1 IF检测添加蛋氨酸后细胞中NFκB1和p-NFκB1的表达与定位 | 第42-44页 |
| 3.3.2 WB检测添加蛋氨酸后细胞中NFκB1和p-NFκB1的表达与定位 | 第44-46页 |
| 3.4 氨基酸处理对乳腺上皮细胞中磷酸化GlyRS的影响 | 第46-48页 |
| 3.4.1 总蛋白水平上氨基酸处理对磷酸化GlyRS的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.2 胞浆和胞核蛋白水平上不同氨基酸对磷酸化GlyRS的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 NFκB1与GlyRS相互作用 | 第48-49页 |
| 3.5.1 胞浆和胞核的提取与纯度鉴定 | 第48页 |
| 3.5.2 NFκB1与GlyRS相互作用验证 | 第48-49页 |
| 3.6 p-GlyRS与GCN2/e IF2α 途径的关系研究 | 第49-55页 |
| 3.6.1 GlyRS过表达对GCN2/e IF2α 途径的影响 | 第49-53页 |
| 3.6.2 GlyRS抑制对对GCN2/e IF2α 途径的影响 | 第53-55页 |
| 3.7 蛋白质翻译过程和mTOR途径对GlyRS磷酸化的影响 | 第55-57页 |
| 3.7.1 蛋白质翻译过程对GlyRS磷酸化的影响 | 第55页 |
| 3.7.2 mTOR途径对GlyRS磷酸化的影响 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞添加蛋氨酸泌乳模型中NFκB1的表达与亚细胞定位 | 第57页 |
| 4.2 添加氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞中p-GlyRS的影响 | 第57-58页 |
| 4.3 p-GlyRS与GCN2/eIF2α 途径的关系 | 第58页 |
| 4.4 蛋白质翻译和mTOR途径对GlyRS磷酸化的影响 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第71页 |
