英文缩略词表(Abbreviation) | 第7-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
1 前言 | 第15-17页 |
2 实验材料 | 第17-22页 |
2.1 细胞株、菌株、虫株 | 第17-18页 |
2.2 质粒 | 第18页 |
2.3 实验动物 | 第18页 |
2.4 抗体 | 第18页 |
2.5 主要试剂 | 第18-19页 |
2.6 主要试剂溶液的配制 | 第19-21页 |
2.7 主要仪器与设备 | 第21-22页 |
3 实验方法 | 第22-34页 |
3.1 弓形虫株的复苏与保种 | 第22-23页 |
3.2 重组质粒的构建及提取 | 第23-29页 |
3.2.1 引物设计及合成 | 第23页 |
3.2.2 RH虫株速殖子总RNA的提取及cDNA的合成 | 第23-24页 |
3.2.3 PCR扩增目的基因 | 第24页 |
3.2.4 凝胶回收 | 第24-25页 |
3.2.5 酶切 | 第25-26页 |
3.2.6 连接 | 第26页 |
3.2.7 TOP10感受态细胞的制备与质粒转化 | 第26-27页 |
3.2.8 重组质粒的小量提取 | 第27-28页 |
3.2.9 重组质粒的鉴定 | 第28页 |
3.2.10 质粒的中量提取 | 第28-29页 |
3.2.11 质粒的无菌化处理 | 第29页 |
3.3 细胞培养与转染 | 第29-31页 |
3.3.1 细胞培养 | 第29-30页 |
3.3.2 转染 | 第30-31页 |
3.4 免疫印迹(Immunoblotting,IB) | 第31-33页 |
3.4.1 蛋白样品的制备 | 第31页 |
3.4.2 SDS-PAGE胶的配制 | 第31-32页 |
3.4.3 上样电泳 | 第32页 |
3.4.4 转膜 | 第32页 |
3.4.5 IB检测 | 第32-33页 |
3.5 脑组织免疫荧光 | 第33-34页 |
3.5.1 脑组织提取及组织切片 | 第33页 |
3.5.2 免疫荧光 | 第33-34页 |
3.6 流式细胞术 | 第34页 |
4 结果 | 第34-49页 |
4.1 ROP18质粒的构建及在N2a神经细胞中的表达 | 第34-36页 |
4.2 高表达ROP18转基因弓形虫促进小鼠脑神经元的凋亡 | 第36-39页 |
4.3 ROP18促进N2a神经细胞的凋亡 | 第39-42页 |
4.4 ROP18通过内质网应激途径促进N2a神经细胞的凋亡 | 第42-49页 |
4.4.1 Caspase-12抑制剂预处理对ROP18诱导的神经细胞凋亡的影响 | 第42-45页 |
4.4.2 Caspase-12抑制剂预处理对ROP18引起的凋亡相关蛋白表达的影响 | 第45-49页 |
5 讨论 | 第49-50页 |
6 结论 | 第50页 |
7 创新点 | 第50页 |
8 参考文献 | 第50-55页 |
附录 | 第55-57页 |
致谢 | 第57-58页 |
综述 | 第58-67页 |
参考文献 | 第64-67页 |