| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 血吸虫与血吸虫病 | 第15页 |
| 1.2 血吸虫病需要新的治疗方法 | 第15页 |
| 1.3 细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 1.3.1 细胞凋亡与细胞坏死 | 第16页 |
| 1.3.2 细胞凋亡的典型特征 | 第16页 |
| 1.4 细胞凋亡通路 | 第16-17页 |
| 1.4.1 死亡受体通路 | 第17页 |
| 1.4.2 线粒体通路 | 第17页 |
| 1.4.3 内质网通路 | 第17页 |
| 1.5 日本血吸虫细胞凋亡观察 | 第17-19页 |
| 1.5.1 虫体形态结构观察 | 第17-18页 |
| 1.5.2 细胞水平观察 | 第18页 |
| 1.5.3 染色体水平观察 | 第18页 |
| 1.5.4 基因水平观察 | 第18-19页 |
| 1.6 日本血吸虫重要凋亡基因的研究 | 第19页 |
| 1.7 日本血吸虫半胱天冬酶（Caspase）家族相关研究 | 第19-20页 |
| 1.8 日本血吸虫凋亡与药物靶点的研究 | 第20页 |
| 1.9 本文总体研究思路 | 第20-21页 |
| 第二章 大、小鼠来源日本血吸虫凋亡相关基因的表达分析 | 第21-30页 |
| 2.1. 引言 | 第21页 |
| 2.2. 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 生物材料 | 第21页 |
| 2.2.2 主要试剂和酶 | 第21页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.3. 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.3.1 日本血吸虫全基因组本地BLAST数据库建立 | 第22页 |
| 2.3.2 日本血吸虫凋亡相关基因搜索 | 第22页 |
| 2.3.3 日本血吸虫虫体的收集 | 第22-23页 |
| 2.3.4 各期别日本血吸虫cDNA模板的制备 | 第23-24页 |
| 2.3.5 RT-PCR检测凋亡相关基因的表达量 | 第24-25页 |
| 2.4. 实验结果 | 第25-28页 |
| 2.4.1 日本血吸虫全基因组本地BLAST数据库建立 | 第25-26页 |
| 2.4.2 日本血吸虫凋亡相关基因的搜索 | 第26-27页 |
| 2.4.3 大、小鼠来源不同时期日本血吸虫凋亡相关基因的表达分析 | 第27-28页 |
| 2.5. 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 日本血吸虫凋亡基因Sjcaspase7的克隆、真核表达及生物学功能分析 | 第30-44页 |
| 3.1 引言 | 第30-31页 |
| 3.2 实验材料 | 第31页 |
| 3.2.1. 生物材料 | 第31页 |
| 3.2.2. 主要试剂和酶 | 第31页 |
| 3.2.3. 主要仪器 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-35页 |
| 3.3.1. RNA提取与反转录 | 第31页 |
| 3.3.2. Sjcaspase7基因的克隆 | 第31-32页 |
| 3.3.3. 构建pXJ40-FLAG-Sjcaspase7真核表达质粒 | 第32页 |
| 3.3.4. pXJ40-FLAG-Sjcaspase7质粒转染Hela细胞 | 第32页 |
| 3.3.5. 间接免疫荧光检测rSjcaspase7重组蛋白表达 | 第32页 |
| 3.3.6. Western Blotting分析重组蛋白rSjcaspase7 | 第32-33页 |
| 3.3.7. 抑制剂对Caspase酶活力抑制作用分析 | 第33页 |
| 3.3.8. 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第33页 |
| 3.3.9. RT-PCR分析Sjcaspase7在各时期虫体中的表达 | 第33-34页 |
| 3.3.10. 体外共转染筛选Sjcaspase7小干扰RNA(SiRNA) | 第34页 |
| 3.3.11. Sjcaspase7基因体内干扰 | 第34-35页 |
| 3.3.12. RT-PCR分析Sjcaspase7表达水平 | 第35页 |
| 3.3.13. 虫体Caspase酶活检测 | 第35页 |
| 3.4 实验结果 | 第35-41页 |
| 3.4.1. PCR扩增日本血吸虫Sjcaspase7基因 | 第35页 |
| 3.4.2. IFA检测rSjcaspase7重组蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 3.4.3. Western Blotting分析rSjcaspase7重组蛋白 | 第36-37页 |
| 3.4.4. 抑制剂对Caspase酶活力抑制作用分析 | 第37-38页 |
| 3.4.5. 流式细胞技术检测细胞凋亡 | 第38页 |
| 3.4.6. Sjcaspase7在各时期虫体中表达量 | 第38-39页 |
| 3.4.7. 体外筛选Sjcaspase7优选小干扰RNA( SiRNA ) | 第39页 |
| 3.4.8. RT-PCR分析Sjcaspase7的表达水平 | 第39-40页 |
| 3.4.9. 虫体Caspase酶活力检测 | 第40-41页 |
| 3.4.10.干扰后诱导的减虫和减卵效果 | 第41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 日本血吸虫凋亡基因Sjcaspase3的克隆、真核表达及生物学功能分析 | 第44-56页 |
| 4.1. 引言 | 第44页 |
| 4.2. 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.1. 生物材料 | 第44页 |
| 4.2.2. 主要试剂和酶 | 第44-45页 |
| 4.2.3. 主要仪器 | 第45页 |
| 4.3. 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1. Sjcaspase3基因的克隆 | 第45页 |
| 4.3.2. 生物信息学分析 | 第45页 |
| 4.3.3. RT-PCR分析Sjcaspase3在各期别虫体中的表达量 | 第45-46页 |
| 4.3.4. pXJ40-FLAG-SjCaspase3重组质粒构建 | 第46页 |
| 4.3.5. 转染Hela细胞 | 第46页 |
| 4.3.6. RT-PCR分析Sjcaspase3基因在Hela细胞中的表达 | 第46页 |
| 4.3.7. Western Blotting分析Sjcaspase3蛋白表达 | 第46-47页 |
| 4.3.8. rSjcaspase3重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| 4.3.9. Caspase酶活检测 | 第47页 |
| 4.3.10. 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第47页 |
| 4.4. 实验结果 | 第47-54页 |
| 4.4.1. Sjcaspase3基因克隆和生物信息学分析 | 第47-49页 |
| 4.4.2. Sjcaspase3在各期别虫体中的表达 | 第49-50页 |
| 4.4.3. 重组质粒转染后Hela细胞Sjcaspase3基因转录水平分析 | 第50-51页 |
| 4.4.4. Western Blotting检测转染Hela细胞Sjcaspase3蛋白表达情况 | 第51页 |
| 4.4.5. rSjcaspase3重组蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 4.4.6. 酶活检测 | 第52-54页 |
| 4.4.7. 流式细胞分析检测细胞凋亡 | 第54页 |
| 4.5. 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63-64页 |
