| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 胚胎干细胞研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的获得和应用 | 第12页 |
| 1.1.2 体细胞重编程为干细胞 | 第12-13页 |
| 1.2 遗传修饰技术在哺乳动物疾病模型建立中的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.2.1 传统的遗传修饰技术 | 第14-15页 |
| 1.2.2 基因编辑技术 | 第15-22页 |
| 1.3 RNA甲基化和NSun2基因功能研究进展 | 第22-25页 |
| 1.3.1 m6A的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.2 NSun2基因功能研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 NSun2基因敲除小鼠胚胎干细胞系的建立和功能的初步研究 | 第26-46页 |
| 2.1 材料和方法 | 第26-38页 |
| 2.1.1 主要溶液配制 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂和耗材 | 第27-28页 |
| 2.1.4 小鼠胚胎干细胞系的建立 | 第28-30页 |
| 2.1.5 NSun2基因敲除打靶策略 | 第30页 |
| 2.1.6 NSun2基因打靶质粒的构建和获得 | 第30-33页 |
| 2.1.7 筛选高效的sgRNA | 第33页 |
| 2.1.8 NSun2基因打靶质粒转染胚胎干细胞 | 第33-34页 |
| 2.1.9 流式细胞仪分选 | 第34页 |
| 2.1.10 挑取单克隆细胞系 | 第34页 |
| 2.1.11 NSun2基因敲除胚胎干细胞基因型鉴定 | 第34-36页 |
| 2.1.12 NSun2基因敲除的胚胎干细胞Western blot鉴定 | 第36-37页 |
| 2.1.13 NSun2基因敲除的胚胎干细胞系表型分析 | 第37-38页 |
| 2.2 结果及分析 | 第38-43页 |
| 2.2.1 NSun2基因敲除的胚胎干细胞系的建立 | 第38-39页 |
| 2.2.2 NSun2基因敲除的胚胎干细胞系基因型鉴定结果 | 第39-40页 |
| 2.2.3 NSun2基因敲除的胚胎干细胞系Western Blot鉴定结果 | 第40-41页 |
| 2.2.4 NSun2基因敲除的胚胎干细胞系表型分析结果 | 第41-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-45页 |
| 2.4 结论 | 第45-46页 |
| 第三章 建立NSun2基因敲除的小鼠模型 | 第46-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-51页 |
| 3.1.1 主要溶液配制 | 第46页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第46页 |
| 3.1.3 主要试剂与耗材 | 第46页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第46页 |
| 3.1.5 NSun2基因敲除打靶策略 | 第46-47页 |
| 3.1.6 NSun2基因打靶质粒的构建和获得 | 第47页 |
| 3.1.7 体外转录Cas9和sgRNA | 第47-49页 |
| 3.1.8 胚胎胞质注射获得F0代founder鼠 | 第49页 |
| 3.1.9 F1代NSun2基因杂合敲除小鼠的获得 | 第49-50页 |
| 3.1.10 F2代NSun2基因纯合敲除小鼠的获得 | 第50-51页 |
| 3.2 结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.2.1 获得注射用的Cas9 RNA和sgRNA | 第51页 |
| 3.2.2 F0代founder鼠的获得和基因型鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.3 F1代NSun2基因敲除小鼠的获得和基因型鉴定 | 第52页 |
| 3.2.4 F2代NSun2基因敲除小鼠的获得和基因型鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.5 F2代NSun2基因敲除小鼠Western Blot鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.6 NSun2基因敲除小鼠的表型 | 第54-56页 |
| 3.3 讨论 | 第56-57页 |
| 3.4 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第72页 |
