| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-18页 |
| 1 绪论 | 第18-32页 |
| 1.1 植物转录因子概述 | 第18页 |
| 1.2 TCP转录因子家族 | 第18-21页 |
| 1.2.1 TCP转录因子的特征 | 第19页 |
| 1.2.2 TCP转录因子生物学功能研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 生物信息学在西瓜TCP基因家族研究中的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 西瓜株型性状研究进展 | 第22-25页 |
| 1.4.1 株高性状的遗传研究 | 第22-23页 |
| 1.4.2 叶片衰老性状研究概况 | 第23-25页 |
| 1.5 植物对赤霉素响应的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.5.1 赤霉素的作用机理与基因表达调控 | 第25-27页 |
| 1.5.2 赤霉素信号转导模式 | 第27-28页 |
| 1.5.3 赤霉素对茎部生长的影响 | 第28页 |
| 1.6 Gateway克隆技术及农杆菌介导转化法 | 第28-31页 |
| 1.6.1 Gateway技术原理 | 第28-30页 |
| 1.6.2 农杆菌介导的转化 | 第30-31页 |
| 1.7 研究依据及目的意义 | 第31-32页 |
| 2 西瓜TCP转录因子家族成员的鉴定及表达分析 | 第32-47页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-37页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第32页 |
| 2.1.1.1 基因组数据库序列来源 | 第32页 |
| 2.1.1.2 植物材料与处理 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2.1.4 西瓜TCP基因的鉴定及命名 | 第33页 |
| 2.1.5 西瓜TCP基因的结构分析 | 第33-34页 |
| 2.1.6 西瓜TCP基因染色体位置分析 | 第34页 |
| 2.1.7 西瓜TCP基因系统进化树的构建 | 第34页 |
| 2.1.8 西瓜TCP基因保守基序的分析 | 第34页 |
| 2.1.9 总RNA的提取(试剂盒由TIANGEN公司提供） | 第34-35页 |
| 2.1.10 cDNA第一条链的合成(TOYOBO的反转录试剂盒） | 第35-36页 |
| 2.1.11 半定量RT-PCR扩增 | 第36-37页 |
| 2.2 结果与分析 | 第37-45页 |
| 2.2.1 西瓜TCP基因的属性特征 | 第37-38页 |
| 2.2.2 西瓜TCP基因的结构分析 | 第38-39页 |
| 2.2.3 西瓜TCP基因的染色体位置及同源性分析 | 第39-41页 |
| 2.2.4 西瓜TCP基因系统发育关系分析 | 第41-42页 |
| 2.2.5 西瓜TCP基因保守结构域分析及亚家族分类 | 第42-44页 |
| 2.2.6 西瓜TCP基因的表达谱分析 | 第44-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-47页 |
| 3 西瓜ClTCP14α和ClTCP15基因的克隆及功能验证 | 第47-66页 |
| 3.1 材料和方法 | 第47-58页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第47页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 3.1.1.2 载体和菌株 | 第47页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第48-49页 |
| 3.1.4 赤霉素处理对ClTCP14a和ClTCP15基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.4.1 总RNA的提取 | 第49页 |
| 3.1.4.2 cDNA第一条链的合成 | 第49页 |
| 3.1.4.3 ClTCP14a和ClTCP15基因定量表达分析 | 第49-50页 |
| 3.1.5 ClTCP14a和ClTCP15基因全长的克隆 | 第50-52页 |
| 3.1.5.1 PCR产物的回收纯化 | 第51页 |
| 3.1.5.2 目的片段与载体的连接 | 第51-52页 |
| 3.1.5.3 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第52页 |
| 3.1.6 植物表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.1.6.1 质粒的提取 | 第52-53页 |
| 3.1.6.2 添加attB接头的PCR | 第53页 |
| 3.1.6.3 BP反应 | 第53-54页 |
| 3.1.6.4 LR反应 | 第54页 |
| 3.1.7 转化农杆菌 | 第54-55页 |
| 3.1.7.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| 3.1.7.2 质粒转化农杆菌 | 第55页 |
| 3.1.8 花序浸染法转化拟南芥 | 第55-56页 |
| 3.1.9 转基因拟南芥的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.1.9.1 转基因拟南芥的抗性筛选 | 第56页 |
| 3.1.9.2 植物DNA快速提取 | 第56-57页 |
| 3.1.9.3 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第57页 |
| 3.1.10 拟南芥纯合突变体的鉴定 | 第57页 |
| 3.1.11 转基因拟南芥株高性状分析 | 第57-58页 |
| 3.1.12 ClTCP14a和ClTCP15基因过量表达对赤霉素代谢途径的影响 | 第58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-64页 |
| 3.2.1 赤霉素对西瓜株高及ClTCP14a和ClTCP15基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.2 纯合tcp14 tcp15双突变体的鉴定 | 第59-60页 |
| 3.2.3 转基因拟南芥的鉴定 | 第60-62页 |
| 3.2.3.1 转基因拟南芥的抗性筛选 | 第60-61页 |
| 3.2.3.2 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2.4 ClTCP14a和ClTCP15基因过表达植株株高性状的分析 | 第62-63页 |
| 3.2.5 ClTCP14a和ClTCP15过量表达对赤霉素代谢相关基因表达水平的影响 | 第63-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-66页 |
| 4 TCP转录因子在西瓜叶片衰老过程中的功能分析 | 第66-75页 |
| 4.1 材料和方法 | 第66-68页 |
| 4.1.1 植物材料及处理 | 第66页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第66-67页 |
| 4.1.4 叶绿素含量测定 | 第67页 |
| 4.1.5 离子渗透率测量 | 第67-68页 |
| 4.1.6 西瓜TCP基因在叶片衰老过程中的表达分析 | 第68页 |
| 4.1.6.1 总RNA的提取 | 第68页 |
| 4.1.6.2 cDNA第一条链的合成 | 第68页 |
| 4.1.6.3 西瓜TCP基因的定量表达分析 | 第68页 |
| 4.1.7 ClTCP1a基因转化拟南芥 | 第68页 |
| 4.2 结果与分析 | 第68-73页 |
| 4.2.1 自然衰老和黑暗诱导衰老过程中叶片生化指标的变化 | 第68-70页 |
| 4.2.2 ClTCP1a,2a,16,20a,21是叶片衰老相关基因 | 第70-72页 |
| 4.2.3 ClTCP1a基因转化拟南芥的PCR鉴定 | 第72页 |
| 4.2.4 过量表达ClTCP1a基因对拟南芥叶片衰老的影响 | 第72-73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-75页 |
| 5 结论与展望 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 后续工作及展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-89页 |
| 附录 | 第89-93页 |
| 附录1 常用培养基和相关试剂的配制方法 | 第89-90页 |
| 附录2 西瓜TCP基因半定量RT-PCR引物序列表 | 第90-91页 |
| 附录3 西瓜TCP基因定量RT-PCR引物序列表 | 第91-92页 |
| 附录4 pEASY-T1克隆载体结构图 | 第92页 |
| 附录5 pDONR221入门载体图谱 | 第92-93页 |
| 附录6 pMDC83表达载体图谱 | 第93页 |
