| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1. 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 肝癌 | 第12-14页 |
| 1.1.1 肝癌的致病因素及诊断方式 | 第12-13页 |
| 1.1.2 肝癌的预防 | 第13页 |
| 1.1.3 肝癌的治疗 | 第13-14页 |
| 1.2 肿瘤细胞的代谢重编程(代谢重排) | 第14-21页 |
| 1.2.1 肿瘤细胞的代谢及特征 | 第14-18页 |
| 1.2.2 肿瘤细胞代谢程序重编程驱动机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 M2型丙酮酸激酶在葡萄糖代谢中的作用 | 第19-21页 |
| 1.2.4 肿瘤细胞内谷氨酰胺的代谢 | 第21页 |
| 1.3 C1orf61的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 C1orf61的结构 | 第22页 |
| 1.3.2 C1orf61的功能 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的出发点 | 第23-24页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第24页 |
| 2.1.2 实验药品与试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 抗体 | 第25页 |
| 2.1.4 质粒及细胞转染 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.1.7 生物学软件 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 细胞复苏、传代及冻存 | 第28-29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| 2.2.3 细胞转染(6孔板) | 第29-30页 |
| 2.2.4 RNA的提取与定量 | 第30页 |
| 2.2.5 重组干扰RNA的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.6 慢病毒的包装与细胞感染 | 第31页 |
| 2.2.7 细胞总蛋白的提取与定量 | 第31-32页 |
| 2.2.8 细胞核质抽提 | 第32页 |
| 2.2.9 蛋白质免疫印迹 | 第32-33页 |
| 2.2.10 激光扫描共聚焦分析 | 第33-34页 |
| 2.2.11 基因芯片分析 | 第34页 |
| 2.2.12 质谱分析 | 第34页 |
| 2.2.13 蛋白质免疫共沉淀 | 第34-35页 |
| 2.2.14 非变性蛋白电泳(Native PAGE) | 第35页 |
| 2.2.15 2-NBDG摄取检测 | 第35-36页 |
| 2.2.16 平板克隆形成实验 | 第36页 |
| 2.2.17 软琼脂克隆形成实验 | 第36页 |
| 2.2.18 丙酮酸激酶(PKM)mRNA酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.19 Rhodamine 123测定线粒体膜电位 | 第37页 |
| 2.2.20 细胞低氧处理 | 第37-38页 |
| 3. 实验结果 | 第38-65页 |
| 3.1 C1orf61促进肝细胞代谢重编程 | 第38-47页 |
| 3.1.1 C1orf61在肝癌细胞系中的表达 | 第38-40页 |
| 3.1.2 C1orf61上调代谢相关基因的表达 | 第40-42页 |
| 3.1.3 C1orf61的表达与肝细胞的代谢异常相关 | 第42-47页 |
| 3.2 C1orf61导致的细胞代谢异常改变与M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达相关 | 第47-53页 |
| 3.2.1 Q-PCR检测糖酵解相关基因的表达水平 | 第47-48页 |
| 3.2.2 Western Blot检测代谢相关蛋白的表达 | 第48-52页 |
| 3.2.3 C1orf61的表达促进PKM2的多聚化 | 第52-53页 |
| 3.3 C1orf61激活c-Myc促进PKM2的表达,但与HIF1A无关 | 第53-55页 |
| 3.3.1 C1orf61通过c-Myc途径来促进PKM2的表达 | 第53-54页 |
| 3.3.2 C1orf61调控的糖酵解过程与HIF1A的表达及分布无关 | 第54-55页 |
| 3.4 C1orf61通过激活Akt调节细胞代谢重编程 | 第55-58页 |
| 3.4.1 Akt参与C1orf61调控的代谢重编程过程 | 第56-58页 |
| 3.5 C1orf61激活p-Akt调控细胞糖酵解依赖于NRP2 | 第58-60页 |
| 3.5.1 C1orf61与NRP2相互作用激活NRP2 | 第58-60页 |
| 3.6 C1orf61表达上调可增强细胞干性 | 第60-65页 |
| 3.6.1 C1orf61表达水平上调导致细胞干性增强 | 第60-62页 |
| 3.6.2 C1orf61促进平板克隆和软琼脂克隆形成 | 第62-63页 |
| 3.6.3 C1orf61诱导的PKM2无明显胞核转移现象 | 第63-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 缩略词 | 第72-73页 |
| 硕士期间待发表论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
