大肠杆菌表达重组人胰激肽原酶
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| ·人胰激肽原酶简介 | 第11-15页 |
| ·人组织激肽释放酶基因家族概述 | 第11-13页 |
| ·人激肽释放酶的结构特点 | 第13页 |
| ·KLK基因的生物学作用及相关机制 | 第13-14页 |
| ·人激肽释放酶与疾病 | 第14-15页 |
| ·激肽释放酶的生产方法 | 第15-16页 |
| ·传统提取方法 | 第15-16页 |
| ·基因工程的方法 | 第16页 |
| ·大肠杆菌表达系统简介 | 第16-18页 |
| ·外源基因 | 第17页 |
| ·表达载体 | 第17-18页 |
| ·表达宿主菌 | 第18页 |
| ·重组蛋白的分离纯化技术 | 第18-22页 |
| ·层析方法的选择 | 第19-20页 |
| ·亲和层析 | 第20页 |
| ·离子交换层析 | 第20-21页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第21页 |
| ·其他方法 | 第21-22页 |
| ·本课题的研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 人胰激肽原酶基因的克隆 | 第23-35页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·引物设计及合成 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物回收(试剂盒) | 第25-26页 |
| ·连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第26-27页 |
| ·细胞转化 | 第27页 |
| ·质粒提取(碱裂解法) | 第27-28页 |
| ·酶切鉴定 | 第28页 |
| ·基因测序鉴定 | 第28页 |
| ·表达载体pET-22b-hpk的构建 | 第28-29页 |
| ·结果分析与讨论 | 第29-32页 |
| ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·测序鉴定 | 第30页 |
| ·表达载体pET-22b-hpk的构建 | 第30-32页 |
| ·本章小结 | 第32-35页 |
| 第三章 人胰激肽原酶基因工程菌培养条件的优化 | 第35-47页 |
| ·引言 | 第35-36页 |
| ·试验材料与仪器 | 第36-37页 |
| ·试验材料 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37页 |
| ·菌种活化 | 第37页 |
| ·菌种培养 | 第37页 |
| ·发酵过程各因素的影响 | 第37-38页 |
| ·培养时间 | 第37页 |
| ·诱导条件 | 第37-38页 |
| ·分析方法 | 第38-39页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE分析目标蛋白表达量 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-45页 |
| ·基因工程菌的生长曲线 | 第39-40页 |
| ·不同诱导条件对重组蛋白表达量的影响 | 第40-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第四章 重组人胰激肽原酶的分离及活性测定 | 第47-59页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·实验材料和仪器 | 第47-48页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·实验仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·重组人胰激肽原酶在大肠杆菌内的分布 | 第48-50页 |
| ·重组人胰激肽原酶的分离纯化 | 第50-51页 |
| ·MALDI-TOF-MS/MS鉴定人胰激肽原酶 | 第51页 |
| ·分析方法 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第51-52页 |
| ·人胰激肽原酶活性的鉴定 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·重组人胰激肽原酶在菌体中的分布 | 第52-54页 |
| ·重组人胰激肽原酶的粗分离 | 第54页 |
| ·重组人胰激肽原酶的活性鉴定 | 第54-56页 |
| ·MALDI-TOF-MS/MS鉴定人胰激肽原酶 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第五章 结论与建议 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·建议 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 附录一 各种试剂的配制 | 第65-68页 |
| 附录二 培养基 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第70-71页 |
| 作者和导师简介 | 第71-72页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第72-73页 |
