| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献总述 | 第10-23页 |
| 1.1 α -葡聚糖 | 第10-14页 |
| 1.1.1 α-葡聚糖的概述 | 第10-11页 |
| 1.1.2 α-葡聚糖的来源 | 第11-13页 |
| 1.1.3 α-葡聚糖的危害 | 第13-14页 |
| 1.2 α-葡聚糖酶 | 第14-20页 |
| 1.2.1 α-葡聚糖酶的概述及作用机理 | 第14-15页 |
| 1.2.2 α-葡聚糖酶的主要来源 | 第15-17页 |
| 1.2.3 α-葡聚糖酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 α-葡聚糖酶的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 基因表达系统简介 | 第20-21页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统 | 第20页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.3 解脂耶氏酵母表达系统 | 第21页 |
| 1.4 本课题的研究目的与内容 | 第21-23页 |
| 第2章 细丽毛壳α-葡聚糖酶的诱导培养及纯化分析 | 第23-37页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 菌株 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基与主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 菌种保藏 | 第24页 |
| 2.2.4 主要设备及仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 α-葡聚糖酶酶活检测方法 | 第25-26页 |
| 2.3.2 蛋白质含量的检测 | 第26页 |
| 2.3.3 细丽毛壳的诱导培养 | 第26页 |
| 2.3.4 细丽毛壳α-葡聚糖酶的蛋白纯化 | 第26-28页 |
| 2.3.5 细丽毛壳分泌蛋白的SDS-PAGE电泳分析及质谱鉴定 | 第28页 |
| 2.3.6 细丽毛壳α-葡聚糖酶纯酶酶学性质分析 | 第28-29页 |
| 2.4 结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.4.1 α-葡聚糖酶酶活及蛋白浓度检测标准曲线 | 第29-30页 |
| 2.4.2 细丽毛壳的发酵培养 | 第30页 |
| 2.4.3 细丽毛壳α-葡聚糖酶的蛋白纯化 | 第30-32页 |
| 2.4.4 细丽毛壳分泌蛋白的SDS-PAGE电泳分析及质谱鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4.5 细丽毛壳α-葡聚糖酶酶学性质分析 | 第33-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-37页 |
| 第3章 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因的克隆及分析 | 第37-54页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 载体及菌株 | 第37页 |
| 3.2.2 培养基与主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要设备及仪器 | 第38页 |
| 3.2.4 PCR扩增引物 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-45页 |
| 3.3.1 细丽毛壳基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 3.3.2 细丽毛壳总RNA的提取 | 第39页 |
| 3.3.3 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因的钓取 | 第39-42页 |
| 3.3.4 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码序列的基因走读 | 第42-43页 |
| 3.3.5 cDNA的合成 | 第43-44页 |
| 3.3.6 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因的3'-RACE | 第44-45页 |
| 3.3.7 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因全长的扩增 | 第45页 |
| 3.3.8 基因序列的分析 | 第45页 |
| 3.4 结果与分析 | 第45-53页 |
| 3.4.1 细丽毛壳基因组DNA的提取 | 第45页 |
| 3.4.2 细丽毛壳总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 3.4.3 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因的钓取 | 第46页 |
| 3.4.4 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因的基因走读 | 第46-48页 |
| 3.4.5 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因的3'-RACE | 第48-49页 |
| 3.4.6 细丽毛壳α-葡聚糖酶编码基因全长的扩增 | 第49页 |
| 3.4.7 基因序列的分析 | 第49-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 第4章 细丽毛壳α-葡聚糖酶基因工程菌的构建及异源表达 | 第54-76页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-56页 |
| 4.2.1 载体及菌株 | 第54页 |
| 4.2.2 培养基及主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.3 主要设备及仪器 | 第55页 |
| 4.2.4 PCR扩增引物 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-64页 |
| 4.3.1 细丽毛壳α-葡聚糖酶在大肠杆菌中的表达 | 第56-59页 |
| 4.3.2 细丽毛壳α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第59-61页 |
| 4.3.3 细丽毛壳α-葡聚糖酶在解脂耶氏酵母中的表达 | 第61-64页 |
| 4.4 结果与分析 | 第64-74页 |
| 4.4.1 细丽毛壳α-葡聚糖酶在大肠杆菌中的表达 | 第64-67页 |
| 4.4.2 细丽毛壳α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第67-70页 |
| 4.4.3 细丽毛壳α-葡聚糖酶在解脂耶氏酵母中的表达 | 第70-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-76页 |
| 第5章 细丽毛壳α-葡聚糖酶基因的点突变研究 | 第76-81页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 实验材料 | 第76-77页 |
| 5.2.1 菌株、载体及培养基 | 第76-77页 |
| 5.2.2 PCR扩增引物 | 第77页 |
| 5.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 5.3.1 细丽毛壳α-葡聚糖酶基因点突变 | 第77页 |
| 5.3.2 点突变产物毕赤酵母基因工程菌的构建 | 第77-78页 |
| 5.3.3 点突变重组蛋白的诱导培养 | 第78页 |
| 5.3.4 点突变蛋白酶活分析 | 第78页 |
| 5.4 结果与分析 | 第78-80页 |
| 5.4.1 点突变目的片段的PCR扩增 | 第78页 |
| 5.4.2 点突变毕赤酵母基因工程菌的构建 | 第78-79页 |
| 5.4.3 点突变重组蛋白的培养及酶活检测 | 第79-80页 |
| 5.5 小结 | 第80-81页 |
| 第6章 总结及展望 | 第81-83页 |
| 6.1 课题小结 | 第81-82页 |
| 6.2 课题展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
