| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第19-21页 |
| 第1章 绪论 | 第21-39页 |
| 1.1 细菌中磷脂的简介 | 第21-25页 |
| 1.1.1 生物合成磷脂酰胆碱（PC） | 第22-24页 |
| 1.1.1.1 真核生物中PC的生物合成 | 第23页 |
| 1.1.1.2 原核生物中PC的生物合成 | 第23-24页 |
| 1.1.2 PC的生物学功能 | 第24-25页 |
| 1.2 丁香假单胞菌 | 第25页 |
| 1.2.1 丁香假单胞菌生物学特征 | 第25页 |
| 1.2.2 丁香假单胞菌中PC的生物合成 | 第25页 |
| 1.3 细菌的T3SS | 第25-33页 |
| 1.3.1 T3SS简介 | 第25-26页 |
| 1.3.2 T3SS的结构 | 第26-30页 |
| 1.3.3 植物病原菌中的T3SS | 第30-32页 |
| 1.3.4 植物病原菌在侵染宿主时T3SS的作用 | 第32-33页 |
| 1.4 分离和纯化蛋白质的方法 | 第33-37页 |
| 1.4.1 根据溶解度不同的方法 | 第33-34页 |
| 1.4.1.1 盐析沉淀法 | 第33页 |
| 1.4.1.2 等电点沉淀法 | 第33-34页 |
| 1.4.1.3 有机溶剂法 | 第34页 |
| 1.4.1.4 双水相萃取法 | 第34页 |
| 1.4.1.5 反胶团萃取法 | 第34页 |
| 1.4.2 根据蛋白质电荷不同的分离方法 | 第34-35页 |
| 1.4.2.1 电泳法 | 第34-35页 |
| 1.4.2.2 离子交换层析法 | 第35页 |
| 1.4.3 根据蛋白质分子大小不同的分离方法 | 第35-36页 |
| 1.4.3.1 透析与超滤法 | 第35页 |
| 1.4.3.2 离心法 | 第35-36页 |
| 1.4.3.3 凝胶过滤法 | 第36页 |
| 1.4.4 利用蛋白质对配体的特异亲和力的分离方法 | 第36页 |
| 1.4.5 选择性吸附性不同的分离方法 | 第36-37页 |
| 1.4.5.1 羟磷灰石层析 | 第36页 |
| 1.4.5.2 疏水作用层析 | 第36-37页 |
| 1.4.6 色谱法 | 第37页 |
| 1.4.6.1 反相高效液相色谱法 | 第37页 |
| 1.4.6.2 正交轴逆流色谱法 | 第37页 |
| 1.4.6.3 微乳液毛细管电动色谱分离法(MEEKC) | 第37页 |
| 1.5 本研究的内容、目的及意义 | 第37-39页 |
| 第2章 磷脂酰胆碱对丁香假单胞菌T3SS相关蛋白翻译转运的影响 | 第39-102页 |
| 2.1 实验所用的材料、仪器与试剂 | 第39-46页 |
| 2.1.1 实验所用菌株 | 第39页 |
| 2.1.2 实验所用载体 | 第39页 |
| 2.1.3 实验所用引物 | 第39-40页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第40-41页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第41页 |
| 2.1.6 所用培养基及配制 | 第41-42页 |
| 2.1.7 主要溶液及其配制 | 第42-46页 |
| 2.1.7.1 常用试剂、缓冲液试剂 | 第42页 |
| 2.1.7.2 细菌总DNA抽提相关试剂 | 第42页 |
| 2.1.7.3 质粒DNA抽提相关试剂 | 第42页 |
| 2.1.7.4 DNA琼脂糖凝胶回收相关试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.7.5 DNA电泳相关试剂 | 第43页 |
| 2.1.7.6 诱导表达试剂 | 第43页 |
| 2.1.7.7 SDS-PAGE相关试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.7.8 蛋白质的纯化试剂及配制 | 第44-45页 |
| 2.1.7.8.1 His标签蛋白纯化试 | 第44-45页 |
| 2.1.7.8.2 GST标签蛋白的纯化试剂 | 第45页 |
| 2.1.7.9 处理透析袋相关试剂 | 第45页 |
| 2.1.7.10 蛋白质浓度测定相关试剂 | 第45-46页 |
| 2.1.7.11 ELISA法测定抗体血清效价相关试剂 | 第46页 |
| 2.1.7.12 Western blot相关试剂 | 第46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-62页 |
| 2.2.1 T3SS中hrp基因簇的克隆 | 第46-49页 |
| 2.2.1.1 丁香假单胞菌丁香致病变种1336基因组DNA的制备 | 第46页 |
| 2.2.1.2 hrpA2、hrpB、hrpF、hrpT的PCR扩增 | 第46-49页 |
| 2.2.2 PCR产物分别连T载，转化，阳性克隆的筛选 | 第49-52页 |
| 2.2.2.1 hrpA2、hrpB、hrpF、hrpT的PCR产物回收 | 第49页 |
| 2.2.2.2 E.Coli DH5α 感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| 2.2.2.3 连T载、转化 | 第50-51页 |
| 2.2.2.4 筛选阳性克隆子 | 第51-52页 |
| 2.2.3 hrpA2、hrpB、hrpF、hrpT基因的表达载体的构建以及表达 | 第52-54页 |
| 2.2.3.1 表达载体的构建 | 第52页 |
| 2.2.3.2 重组子蛋白的诱导表达 | 第52-53页 |
| 2.2.3.3 SDS-PAGE | 第53-54页 |
| 2.2.4 重组蛋白的纯化 | 第54-57页 |
| 2.2.4.1 His-Tag标签蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 2.2.4.1.1 包涵体蛋白的处理 | 第54页 |
| 2.2.4.1.2 包涵体蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 2.2.4.2 GST标签蛋白的纯化 | 第55-57页 |
| 2.2.5 目的蛋白的浓缩、浓度测定及保藏 | 第57-62页 |
| 2.2.5.1 透析袋的处理 | 第57-58页 |
| 2.2.5.2 目的蛋白的浓缩 | 第58页 |
| 2.2.5.3 蛋白浓度测定 | 第58-59页 |
| 2.2.5.4 蛋白质的保存 | 第59页 |
| 2.2.2.6 制备多克隆抗体血清 | 第59页 |
| 2.2.2.7 抗体血清效价测定 | 第59-60页 |
| 2.2.2.8 丁香假单胞菌胞质蛋白、膜蛋白的提取 | 第60-61页 |
| 2.2.2.8.1 丁香假单胞菌胞质蛋白提取 | 第60页 |
| 2.2.2.8.2 丁香假单胞菌膜蛋白提取 | 第60-61页 |
| 2.2.2.9 Western blot检测 | 第61-62页 |
| 2.3 实验结果 | 第62-102页 |
| 2.3.1 基因的克隆 | 第62-71页 |
| 2.3.1.1 丁香假单胞菌1336基因组DNA的制备 | 第62页 |
| 2.3.1.2 hrp-基因的克隆及其理化性质的分析 | 第62-71页 |
| 2.3.1.2.1 克隆hrpA2基因及理化性质分析 | 第62页 |
| 2.3.1.2.1.1 克隆hrpA2基因 | 第62-64页 |
| 2.3.1.2.1.2 hrpA2基因产物的理化性质 | 第64-65页 |
| 2.3.1.2.2 克隆hrpB基因及理化性质分析 | 第65页 |
| 2.3.1.2.2.1 克隆hrpB基因 | 第65-66页 |
| 2.3.1.2.2.2 hrpB基因产物的理化性质 | 第66-67页 |
| 2.3.1.2.3 克隆hrpF基因及理化性质分析 | 第67页 |
| 2.3.1.2.3.1 克隆hrpF基因 | 第67-68页 |
| 2.3.1.2.3.2 hrpF基因产物的理化性质 | 第68-69页 |
| 2.3.1.2.4 克隆hrpT基因及理化性质分析 | 第69页 |
| 2.3.1.2.4.1 克隆hrpT基因 | 第69-70页 |
| 2.3.1.2.4.2 hrpT基因的产物理化性质 | 第70-71页 |
| 2.3.2 构建pGEX-6p-1 重组表达载体 | 第71-72页 |
| 2.3.3 蛋白的表达 | 第72-79页 |
| 2.3.3.1 表达HrcJ蛋白 | 第72-73页 |
| 2.3.3.2 表达HrpE蛋白 | 第73-74页 |
| 2.3.3.3 表达GST-HrpD蛋白 | 第74-75页 |
| 2.3.3.4 表达GST-HrpA2蛋白 | 第75-76页 |
| 2.3.3.5 表达GST-HrpB蛋白 | 第76-77页 |
| 2.3.3.6 表达GST-HrpF蛋白 | 第77-78页 |
| 2.3.3.7 表达GST-HrpT蛋白 | 第78-79页 |
| 2.3.4 蛋白的纯化 | 第79-86页 |
| 2.3.4.1 纯化HrcJ蛋白 | 第79-80页 |
| 2.3.4.2 纯化HrpE蛋白 | 第80-81页 |
| 2.3.4.3 纯化GST-hrpD蛋白 | 第81-82页 |
| 2.3.4.4 纯化GST-hrpA2蛋白 | 第82-83页 |
| 2.3.4.5 纯化GST-hrpB蛋白 | 第83-84页 |
| 2.3.4.6 纯化GST-hrpF蛋白 | 第84-85页 |
| 2.3.4.7 纯化GST-hrpT蛋白 | 第85-86页 |
| 2.3.5 制备多克隆抗体血清及效价测定 | 第86-93页 |
| 2.3.5.1 HrcJ蛋白多克隆抗体血清的效价测定 | 第86-87页 |
| 2.3.5.2 HrpE蛋白抗体血清的效价测定 | 第87-88页 |
| 2.3.5.3 GST-hrpD蛋白抗体血清的效价测定 | 第88-89页 |
| 2.3.5.4 GST-hrpA2蛋白抗体血清的效价测定 | 第89-90页 |
| 2.3.5.5 GST-hrpB蛋白抗体血清的效价测定 | 第90-91页 |
| 2.3.5.6 GST-hrpF蛋白抗体血清的效价测定 | 第91-92页 |
| 2.3.5.7 GST-hrpT蛋白抗体血清的效价测定 | 第92-93页 |
| 2.3.6 丁香假单胞菌1336野生型和丁香假单胞菌 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白含量比较 | 第93-102页 |
| 2.3.6.1 HrcJ蛋白在1336野生型和 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白中的含量比较 | 第93-94页 |
| 2.3.6.2 GST-HrcQb蛋白在1336野生型和 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第94页 |
| 2.3.6.3 GST-HrpA2蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第94-95页 |
| 2.3.6.4 GST-HrpB蛋白在1336野生型和 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第95页 |
| 2.3.6.5 GST-HrpD蛋白在1336野生型和 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第95-96页 |
| 2.3.6.6 HrpE蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第96页 |
| 2.3.6.7 GST-HrpF蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第96-97页 |
| 2.3.6.8 HrpG蛋白在1336野生型和 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第97页 |
| 2.3.6.9 HrpO蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第97-98页 |
| 2.3.6.10 HrpR蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中的含量比较 | 第98页 |
| 2.3.6.11 HrpS蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第98-99页 |
| 2.3.6.12 GST-HrpT蛋白在1336野生型和 1336 pcs-突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第99页 |
| 2.3.6.13 HrpV蛋白在1336野生型和 1336 pcs- 突变型胞质蛋白和膜蛋白中含量比较 | 第99-102页 |
| 第3章 总结与展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 附录 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
