| 致谢 | 第5-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-17页 |
| 1 原始生殖细胞的研究进展 | 第11-12页 |
| 2 原始生殖细胞的起源和迁移定位 | 第12页 |
| 3 原始生殖细胞的生物学特性 | 第12页 |
| 3.1 原始生殖细胞的形态和生长特性 | 第12页 |
| 3.2 原始生殖细胞的分化全能性 | 第12页 |
| 4 各种动物PGCs的研究进展 | 第12-14页 |
| 4.1 小鼠 | 第12-13页 |
| 4.2 牛 | 第13页 |
| 4.3 猪 | 第13-14页 |
| 4.4 人 | 第14页 |
| 4.5 兔 | 第14页 |
| 4.6 鸡 | 第14页 |
| 5 关于饲养层的研究进展 | 第14-15页 |
| 6 原始生殖细胞的分离培养 | 第15页 |
| 7 原始生殖细胞的鉴定 | 第15页 |
| 7.1 形态学鉴定 | 第15页 |
| 7.2 碱性磷酸酶（AKP）染色鉴定 | 第15页 |
| 7.3 发育全能性标志基因的表达 | 第15页 |
| 8 原始生殖细胞应用的意义与前景 | 第15-17页 |
| 试验一 MEF和REF的体外培养、冻存与优化 | 第17-29页 |
| 引言 | 第17页 |
| 1 材料与方法 | 第17-21页 |
| 1.1 试验材料 | 第17-18页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第17页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第18-19页 |
| 1.2.1 PBS缓冲液的配制 | 第18页 |
| 1.2.2 消化液的配制 | 第18页 |
| 1.2.3 胚胎成纤维细胞培养液的配制 | 第18页 |
| 1.2.4 1mol/L盐酸的配制 | 第18页 |
| 1.2.5 1mol/L氢氧化钠的配制 | 第18-19页 |
| 1.2.6 100μg/mL丝裂霉素C存储液的配置 | 第19页 |
| 1.2.7 孕马血清促性腺激素（PMSG）注射液 | 第19页 |
| 1.2.8 人绒毛膜素性腺激素（HCG）注射液 | 第19页 |
| 1.2.9 双抗的分装冻存 | 第19页 |
| 1.2.10 FBS的分装冻存 | 第19页 |
| 1.2.11 冻存液 | 第19页 |
| 1.3 试验方法 | 第19-21页 |
| 1.3.1 小鼠超排 | 第19页 |
| 1.3.2 MEF、REF的分离培养 | 第19-20页 |
| 1.3.3 MEF、REF的传代培养 | 第20页 |
| 1.3.4 MEF、REF的染色 | 第20页 |
| 1.3.4.1 MEF、REF的HE染色 | 第20页 |
| 1.3.4.2 MEF、REF的姬姆萨染色 | 第20页 |
| 1.3.5 MEF、REF生长曲线的绘制 | 第20页 |
| 1.3.6 MEF、REF的冻存与复苏 | 第20-21页 |
| 1.3.6.1 MEF、REF的冻存 | 第20页 |
| 1.3.6.2 MEF、REF的复苏 | 第20-21页 |
| 1.3.7 饲养层的制备 | 第21页 |
| 1.3.8 细胞计数 | 第21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-27页 |
| 2.1 MEF、REF原代培养和生物学特性 | 第21-22页 |
| 2.2 MEF、REF传代培养和不同代数生长特性与增殖能力 | 第22-24页 |
| 2.3 MEF、REF染色结果 | 第24-25页 |
| 2.3.1 MEF、REF HE染色结果 | 第24页 |
| 2.3.2 MEF、REF吉姆萨染色结果 | 第24-25页 |
| 2.4 MEF、REF不同代数冻存不同时间的复苏效果 | 第25-27页 |
| 3 讨论 | 第27-28页 |
| 3.1 细胞消化液作用时间对胚胎成纤维细胞活力的影响 | 第27页 |
| 3.2 影响胚胎成纤维细胞冻存、复苏的因素 | 第27页 |
| 3.3 胚胎成纤维细胞的代数对饲养层质量的影响 | 第27页 |
| 3.4 细胞密度对饲养层质量的影响 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-29页 |
| 试验二 兔PGCs的分离培养、鉴定及优化 | 第29-42页 |
| 引言 | 第29页 |
| 1 材料与方法 | 第29-34页 |
| 1.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第29页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第29-30页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第30页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| 1.2.1 胚胎成纤维细胞培养液的配制 | 第30页 |
| 1.2.2 PGCs培养液的配制 | 第30页 |
| 1.2.3 不同成分PCG细胞培养液的配制 | 第30-31页 |
| 1.2.4 1mol/L β-巯基乙醇存储液的配制 | 第31页 |
| 1.2.5 0.2mol/L L-谷氨酰胺存储液的配制 | 第31页 |
| 1.3 试验方法 | 第31-34页 |
| 1.3.1 兔PGCs的分离培养 | 第31页 |
| 1.3.2 兔PGCs的传代培养 | 第31-32页 |
| 1.3.3 兔PGCs的鉴定 | 第32-34页 |
| 1.3.3.1 形态学鉴定 | 第32页 |
| 1.3.3.2 碱性磷酸酶（AKP）染色 | 第32页 |
| 1.3.3.3 RT-PCR检测 | 第32-34页 |
| 1.3.4 MEF、REF制作的不同密度的饲养层对兔PGCs的影响 | 第34页 |
| 1.3.5 是否加细胞因子及血清浓度对兔PGCs的影响 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-39页 |
| 2.1 兔PGCs生长行为的观察 | 第34-35页 |
| 2.2 碱性磷酸酶（AKP）染色检测结果 | 第35页 |
| 2.3 RT-PCR检测结果 | 第35-36页 |
| 2.4 MEF、REF制作的不同密度的饲养层对兔PGCs的影响 | 第36-38页 |
| 2.5 是否加细胞因子及血清浓度对兔PGCs的影响 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-40页 |
| 3.1 同源饲养层对培养PGCs的影响 | 第39页 |
| 3.2 影响PGCs集落传代的因素 | 第39-40页 |
| 3.3 饲养层密度对PGCs的影响 | 第40页 |
| 3.4 血清含量对PGCs的影响 | 第40页 |
| 3.5 生长因子对PGCs的影响 | 第40页 |
| 4 小结 | 第40-42页 |
| 创新点 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 缩写词中英对照表 | 第49-50页 |
| ABSTRACT | 第50-51页 |
