| 名词缩写 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 第一章 综述 | 第10-14页 |
| 1 重组 | 第10页 |
| 1.1 基因重组 | 第10页 |
| 1.2 同源重组 | 第10页 |
| 2 重组工程 | 第10-14页 |
| 2.1 重组工程(recombineering)定义 | 第11页 |
| 2.2 重组工程的现况及应用 | 第11页 |
| 2.3 Red/ ET重组的研究进展 | 第11-14页 |
| 第二章 新型整合至大肠杆菌LS-GR基因组的重组工程酶系统的构建和研究 | 第14-29页 |
| 1 实验材料 | 第15-19页 |
| 1.1 菌种及质粒 | 第15-16页 |
| 1.2 引物合成表 | 第16-17页 |
| 1.3 DNA测序 | 第17页 |
| 1.4 主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.5 培养基及溶液配制 | 第18页 |
| 1.6 设备仪器 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.1 常规分子生物学操作 | 第19-21页 |
| 2.2 盐酸氯四环素诱导的I-SceI归巢内切酶表达质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.3 重组酶活性检测 | 第22-23页 |
| 2.4 基于染色体的重组工程菌株LS-GR中recJ和sbcB的基因敲除及基因型验证 | 第23页 |
| 2.5 高温法将pLS2031从重组菌株中消除 | 第23-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-27页 |
| 3.1 盐酸氯四环素诱导的I-SceI归巢内切酶表达质粒的构建 | 第24-25页 |
| 3.2 基于染色体的重组工程菌株LS-GR中recJ和sbcB的基因敲除 | 第25-27页 |
| 3.3 用SSOR法和DSBR法对recJ和sbcB突变菌株的重组效率检测 | 第27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 Beta结构的功能及其对催化活性的研究 | 第29-38页 |
| 1 实验材料 | 第30-33页 |
| 1.1 菌种及质粒 | 第30-32页 |
| 1.2 引物合成表 | 第32页 |
| 1.3 主要试剂、培养基及溶液配制 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33页 |
| 2.1 常规分子生物学操作 | 第33页 |
| 2.2 重组酶活性检测 | 第33页 |
| 3 Beta结构功能研究的系列克隆的构建流程 | 第33-34页 |
| 4 实验结果 | 第34-36页 |
| 4.1 Beta结构功能研究的系列克隆的构建 | 第34-36页 |
| 4.2 用SSOR法对Beta结构功能的系列克隆的重组效率检测 | 第36页 |
| 5 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 基于Red介导的定点突变技术 | 第38-46页 |
| 1 实验材料 | 第39-40页 |
| 1.1 菌种及质粒 | 第39页 |
| 1.2 引物合成表 | 第39-40页 |
| 1.3 主要试剂、培养基及溶液配制 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-42页 |
| 2.1 常规分子生物学操作 | 第40-41页 |
| 2.2 重叠延伸PCR | 第41页 |
| 2.3 pLS2034构建 | 第41页 |
| 2.4 定点突变实验中带有氨苄抗性基因(Ap)的突变片段扩增 | 第41页 |
| 2.5 大肠杆菌LS2005中的mutS敲除流程 | 第41页 |
| 2.6 大肠杆菌LS2058诱导的重组酶表达体系的实验条件 | 第41-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-45页 |
| 3.1 pLS2034质粒构建 | 第42-43页 |
| 3.2 基于染色体的重组工程菌株LS2005中mutS的基因敲除 | 第43-44页 |
| 3.3 大肠杆菌LS2006介导的同源重组定点突变 | 第44页 |
| 3.4 大肠杆菌LS2058介导的同源重组定点突变 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 硕士期间发表的论文和专利 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
