| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 瓜氨酸 | 第10-14页 |
| 1.1.1 瓜氨酸代谢 | 第10-12页 |
| 1.1.2 瓜氨酸临床功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3 瓜氨酸的检测 | 第13-14页 |
| 1.2 瓜氨酸酶的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 瓜氨酸酶的来源 | 第14页 |
| 1.2.2 瓜氨酸酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 瓜氨酸酶酶活测定及影响因素 | 第15-17页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第17-21页 |
| 1.3.1 载体 | 第17页 |
| 1.3.2 宿主菌 | 第17-18页 |
| 1.3.3 pET表达载体 | 第18页 |
| 1.3.4 优化可溶性表达 | 第18-19页 |
| 1.3.5 包涵体 | 第19页 |
| 1.3.6 重组蛋白的分离纯化 | 第19-21页 |
| 第二章 瓜氨酸酶基因查找、载体构建及克隆表达 | 第21-40页 |
| 2.1 材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 供试菌株、载体及主要培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要供试试剂及仪器 | 第22-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌转化及重组瓜氨酸酶表达 | 第26-28页 |
| 2.2.3 重组瓜氨酸酶的表达 | 第28-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-39页 |
| 2.3.1 Genbank查找目的基因 | 第30-32页 |
| 2.3.2 CTU783,CTU858,OCT基因克隆载体的构建及鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3.3 CTU783,CTU858,OCT重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第34-39页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 重组CTU858蛋白表达条件的优化 | 第40-50页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 供试菌株及主要培养基 | 第40页 |
| 3.1.2 供试试剂及仪器 | 第40-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 菌体破碎方法的选择 | 第41页 |
| 3.2.2 诱导时间对瓜氨酸酶表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.3 温度对CTU858表达的影响 | 第42页 |
| 3.2.4 添加物对CTU858表达的影响 | 第42页 |
| 3.2.5 IPTG浓度对CTU858表达的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.6 培养基pH对CTU858表达的影响 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-49页 |
| 3.3.1 菌体破碎方法的选择 | 第43-44页 |
| 3.3.2 诱导时间对瓜氨酸酶表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.3 温度对瓜氨酸酶表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.4 添加物对瓜氨酸酶表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.5 IPTG浓度对瓜氨酸酶表达的影响 | 第47页 |
| 3.3.6 培养基pH对瓜氨酸酶表达的影响 | 第47-49页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 重组瓜氨酸酶蛋白的分离纯化及活性测定 | 第50-68页 |
| 4.1 材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 供试菌株及主要培养基 | 第50页 |
| 4.1.2 供试试剂及仪器 | 第50-51页 |
| 4.2 方法 | 第51-58页 |
| 4.2.1 可溶性CTU783,CTU858,OCT蛋白分离纯化及酶活测定 | 第51-54页 |
| 4.2.2 CTU858包涵体复性及酶活测定 | 第54-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-66页 |
| 4.3.1 可溶性CTU783,CTU858,OCT分离纯化及复性 | 第58-60页 |
| 4.3.2 TCL初步鉴定可溶性CTU783,CTU858,OCT酶活 | 第60页 |
| 4.3.3 柱前衍生HPLC定量鉴定酶活 | 第60-64页 |
| 4.3.4 CTU858包涵体分离纯化及复性 | 第64-65页 |
| 4.3.5 CTU858包涵体酶活测定 | 第65-66页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 瓜氨酸酶偶联法测定测定瓜氨酸浓度的可行性初探 | 第68-80页 |
| 5.1 材料 | 第68页 |
| 5.1.1 供试菌株及主要培养基 | 第68页 |
| 5.1.2 供试试剂及仪器 | 第68页 |
| 5.2 方法 | 第68-73页 |
| 5.2.1 底物浓度对酶偶联体系的影响 | 第68-70页 |
| 5.2.2 pH的选择 | 第70页 |
| 5.2.3 温度的选择 | 第70-71页 |
| 5.2.4 辅酶ADP浓度的选择 | 第71页 |
| 5.2.5 GLDH量的选择 | 第71-72页 |
| 5.2.6 酶偶联法的线性范围和检测限 | 第72-73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-78页 |
| 5.3.1 底物浓度对酶偶联体系的影响 | 第73页 |
| 5.3.2 pH的选择 | 第73-75页 |
| 5.3.3 温度的选择 | 第75-76页 |
| 5.3.4 辅酶ADP浓度的选择 | 第76页 |
| 5.3.5 GLDH量的选择 | 第76-77页 |
| 5.3.6 酶偶联法的线性范围和检测限 | 第77-78页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第78-80页 |
| 第六章 结论与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读期间发表的学术论文 | 第89页 |
