| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 细胞凋亡概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 细胞凋亡概念 | 第12页 |
| 1.1.2 细胞凋亡的特征描述 | 第12-13页 |
| 1.1.3 细胞凋亡与细胞坏死的区别 | 第13-14页 |
| 1.2 细胞凋亡的途径 | 第14-15页 |
| 1.2.1 外源性细胞的凋亡通路 | 第14-15页 |
| 1.2.2 内源性的细胞凋亡通路 | 第15页 |
| 1.3 细胞色素C在细胞凋亡中的作用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 细胞色素C的释放在凋亡级联反应中必不可少 | 第15-16页 |
| 1.3.2 细胞色素C磷酸化作用可以调控细胞色素C的释放以及凋亡体的形成 | 第16页 |
| 1.3.3 细胞色素C经过心磷脂氧化作用有助于自身的释放 | 第16-17页 |
| 1.4 无细胞体系(cell-free system)与细胞凋亡 | 第17-18页 |
| 1.4.1 无细胞体系 | 第17页 |
| 1.4.2 无细胞体系与细胞凋亡的关系 | 第17-18页 |
| 1.4.3 无细胞体系的分类及制备方法 | 第18页 |
| 1.5 半胱氨酸蛋白酶(caspase)与细胞凋亡 | 第18-19页 |
| 1.5.1 半胱氨酸蛋白酶概述 | 第18-19页 |
| 1.5.2 Caspase与细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.6 研究背景和意义 | 第19-21页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 昆虫细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.4 实验试剂的配制 | 第21-25页 |
| 2.1.5 实验主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.2 实验方法与操作步骤 | 第25-31页 |
| 2.2.1 昆虫细胞的复苏与培养 | 第25页 |
| 2.2.2 SL-1 CytC蛋白的纯化(以活化50mL为例) | 第25-26页 |
| 2.2.3 蛋白免疫印迹检测纯化蛋白 | 第26页 |
| 2.2.4 SL-1 CytC多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.5 SL-1细胞无细胞体系的制备 | 第27页 |
| 2.2.6 SL-1细胞核的提取制备 | 第27页 |
| 2.2.7 SL-1内源性细胞色素C激活无细胞体系阈值确定 | 第27-28页 |
| 2.2.8 形态学观察细胞核凋亡情况 | 第28页 |
| 2.2.9 用荧光定量分析法检测SL-1细胞核凋亡后caspase-3的活性 | 第28页 |
| 2.2.10 真核表达载体的构建与转染 | 第28-29页 |
| 2.2.11 目的基因SL-1 Cytc与pIE1-EGFP-N1和pIE1-EGFP-C1连接 | 第29-30页 |
| 2.2.12 Mito-Tracker Red CMXRos标记线粒体 | 第30页 |
| 2.2.13 细胞流式技术检测细胞凋亡率 | 第30-31页 |
| 3. 实验结果 | 第31-43页 |
| 3.1 SL-1 Cytc蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 3.2 SL-1 Cytc多克隆抗体的制备及检测 | 第32-33页 |
| 3.3 斜纹夜蛾内源性细胞色素C在无细胞体系中对细胞凋亡的影响 | 第33-37页 |
| 3.3.1 SL-1细胞核于无细胞凋亡体系中凋亡形态学观察 | 第33-36页 |
| 3.3.2 荧光分光光度计法检测内源性Cyt C在无细胞凋亡体系中对caspase-3的活性的变化 | 第36-37页 |
| 3.4 构建Cyt C真核表达载体,将其转染到S1-1细胞中研究其功能 | 第37-41页 |
| 3.5 真核表达载体转染SL-1细胞后,运用荧光定量法和细胞流式技术检测细胞色素C对细胞凋亡的作用 | 第41-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
