| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 引言 | 第9-12页 |
| 第一章 外源plcR基因在炭疽芽胞杆菌A16R中的表达 | 第12-23页 |
| 1 材料与方法 | 第12-18页 |
| 1.1 实验仪器设备与主要试剂 | 第12-14页 |
| 1.1.1 实验所用主要仪器表 | 第12-13页 |
| 1.1.2 本实验中所用到的试剂 | 第13页 |
| 1.1.3 菌株及质粒 | 第13-14页 |
| 1.2 培养基及相关试剂配制 | 第14页 |
| 1.2.1 培养基及抗生素的配制 | 第14页 |
| 1.2.2 所用试剂的配制 | 第14页 |
| 1.3 pBE2A-plcR/A16R菌株构建 | 第14-16页 |
| 1.3.1 引物设计、合成及测序 | 第14-15页 |
| 1.3.2 A16R感受态的制备 | 第15页 |
| 1.3.3 质粒pBE2A-plcR化转入SCS110去甲基化 | 第15-16页 |
| 1.3.4 质粒pBE2A-plcR电转入A16R | 第16页 |
| 1.4 PlcR蛋白在大肠杆菌中表达、纯化及抗PlcR多克隆抗体制备 | 第16页 |
| 1.5 Western blot分析确认PlcR在炭疽芽胞杆菌中表达 | 第16页 |
| 1.6 表型分析 | 第16-18页 |
| 1.6.1 生长曲线测定 | 第16-17页 |
| 1.6.2 芽胞形成率分析 | 第17页 |
| 1.6.3 溶血现象观察 | 第17页 |
| 1.6.4 卵磷脂酶活性验证 | 第17-18页 |
| 2 结果和分析 | 第18-22页 |
| 2.1 PlcR在炭疽芽胞杆菌的表达 | 第18-20页 |
| 2.1.1 重组plcR表达菌株构建 | 第18页 |
| 2.1.2 PlcR蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及抗PlcR多克隆抗体制备 | 第18-19页 |
| 2.1.3 Western blot分析确认PlcR在炭疽芽胞杆菌中中表达 | 第19-20页 |
| 2.2 表型分析 | 第20-22页 |
| 2.2.1 生长曲线 | 第20页 |
| 2.2.2 溶血验证 | 第20页 |
| 2.2.3 卵磷脂酶活性验证 | 第20-21页 |
| 2.2.4 芽胞形成 | 第21-22页 |
| 3 讨论 | 第22-23页 |
| 第二章 PlcRpapR融合蛋白在A16R中的研究 | 第23-41页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 1.1 实验仪器设备与主要试剂 | 第23-25页 |
| 1.1.1 双向电泳中所用的溶液的配制 | 第24-25页 |
| 1.1.2 胶内酶切时需要的溶液配制 | 第25页 |
| 1.2 融合蛋白载体构建 | 第25页 |
| 1.3 Western blot分析确认融合蛋白在A16R中表达 | 第25页 |
| 1.4 表型分析 | 第25-26页 |
| 1.4.1 芽胞形成及芽胞形成率测定 | 第25页 |
| 1.4.2 溶血现象观察 | 第25-26页 |
| 1.4.3 卵磷脂酶活性验证 | 第26页 |
| 1.4.4 API生化试验 | 第26页 |
| 1.5 RT-PCR | 第26-27页 |
| 1.6 蛋白质组学研究 | 第27-28页 |
| 1.6.1 全菌体蛋白样品的制备 | 第27页 |
| 1.6.2 上清蛋白样品的制备 | 第27-28页 |
| 1.6.3 双向电泳 | 第28页 |
| 1.6.4 差异蛋白点分析、胶内酶切和质谱鉴定 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-37页 |
| 2.1 载体构建 | 第28-29页 |
| 2.2 WB验证融合蛋白的表达 | 第29页 |
| 2.3 表型研究 | 第29-32页 |
| 2.3.1 溶血活性检测结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 卵磷脂酶活性检测结果 | 第30页 |
| 2.3.3 芽胞形成及芽胞形成率结果 | 第30-31页 |
| 2.3.4 API生化实验结果 | 第31-32页 |
| 2.4 RT-PCR | 第32-34页 |
| 2.5 蛋白质组学研究 | 第34-37页 |
| 3 讨论 | 第37-41页 |
| 3.1 融合蛋白的表型分析 | 第37-38页 |
| 3.2 融合蛋白蛋白质组学分析 | 第38-41页 |
| 第三章 溶血传代率研究 | 第41-47页 |
| 1 材料与方法 | 第42页 |
| 1.1 材料 | 第42页 |
| 1.2 方法 | 第42页 |
| 1.2.1 菌株构建 | 第42页 |
| 1.2.2 Westernblot验证融合蛋白在B17DD中表达 | 第42页 |
| 1.2.3 溶血酶活性检测 | 第42页 |
| 1.2.4 卵磷脂酶活性检测 | 第42页 |
| 1.3 溶血传代实验 | 第42页 |
| 2 结果和分析 | 第42-45页 |
| 2.1 Westernblot结果 | 第42-43页 |
| 2.2 溶血酶活性检测结果 | 第43页 |
| 2.3 卵磷脂酶活性检测结果 | 第43页 |
| 2.4 溶血传代结果 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 4 总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录1：API 50 CH生化试剂条的成分 | 第51-52页 |
| 附录2：上清及全菌蛋白的差异点质谱结果 | 第52-68页 |
| 附录3：PlcR-box | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
