| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 1 绪论 | 第17-35页 |
| ·引言 | 第17-19页 |
| ·木材白腐真菌 | 第19-23页 |
| ·白腐真菌生物学概念 | 第19-20页 |
| ·白腐真菌降解木质素酶系 | 第20-23页 |
| ·白腐菌漆酶的简介 | 第23-28页 |
| ·白腐真菌降解木质素酶系 | 第23-24页 |
| ·白腐真菌产漆酶的条件 | 第24页 |
| ·漆酶的理化特性 | 第24-25页 |
| ·白腐菌漆酶催化活性中心 | 第25-26页 |
| ·漆酶的催化机制 | 第26页 |
| ·白腐菌漆酶的三维结构 | 第26-28页 |
| ·漆酶的应用 | 第28-30页 |
| ·造纸工业 | 第28页 |
| ·环境保护与修复 | 第28-29页 |
| ·生物检测 | 第29页 |
| ·食品工业 | 第29页 |
| ·绿色有机合成 | 第29-30页 |
| ·漆酶基因的分子生物学研究进展 | 第30-32页 |
| ·漆酶同工酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·漆酶同工酶基因的结构 | 第31页 |
| ·漆酶同工酶基因的异源表达 | 第31-32页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第32-33页 |
| ·研究目的和意义 | 第33-34页 |
| ·研究的主要内容 | 第34页 |
| ·课题来源 | 第34-35页 |
| 2 偏肿革裥菌漆酶同工酶基因全长的克隆及序列分析 | 第35-94页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·试验引物 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-47页 |
| ·主要培养基 | 第37页 |
| ·菌丝的收集 | 第37页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·简并PCR | 第38页 |
| ·丝状真菌总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR | 第39-40页 |
| ·PCR产物的凝胶回收 | 第40页 |
| ·目的基因片段与T载体的连接 | 第40-41页 |
| ·3'RACE | 第41-42页 |
| ·5'RACE | 第42-43页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1'和Lg-Lac2'基因组全长序列扩增 | 第43页 |
| ·染色体步移扩增偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1'和Lg-Lac2'基因组全长5'及3'非翻译区序列扩增 | 第43-45页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2 cDNA基因全长序列分析 | 第45-46页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1'和Lg-Lac2'基因组全长序列分析 | 第46页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1'和Lg-Lac2'基因组全长5'及3'非翻译区序列分析 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-91页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第47页 |
| ·简并PCR | 第47-48页 |
| ·总RNA的提取 | 第48页 |
| ·RT-PCR扩增偏肿革裥菌漆酶同工酶cDNA基因片段 | 第48-50页 |
| ·3'RACE | 第50-51页 |
| ·5'RACE | 第51-53页 |
| ·拼接得到偏肿革裥菌Lg-lac1和Lg-lac2全长cDNA序列 | 第53-57页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2的cDNA核苷酸序列的同源性比较 | 第57-58页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2蛋白结构分析 | 第58-82页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-lac1'和Lg-lac2'基因组全长序列扩增 | 第82-84页 |
| ·染色体步移扩增漆酶同工酶基因组全长5'及3'非翻译区序列扩增 | 第84-86页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1'和Lg-Lac2'基因组全长序列 | 第86-91页 |
| ·本章小结 | 第91-94页 |
| 3 偏肿革裥菌漆酶cDNA基因实时荧光定量PCR | 第94-98页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·供试菌种 | 第94页 |
| ·主要试剂 | 第94页 |
| ·试验引物 | 第94页 |
| ·主要仪器设备 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-96页 |
| ·主要培养基 | 第94-95页 |
| ·偏肿革裥菌菌丝的Cu~(2+)诱导处理 | 第95页 |
| ·偏肿革裥菌总RNA的制备及质量检测 | 第95页 |
| ·偏肿革裥菌Lg-Lac1、Lg-Lac2及内参基因Lg-GPD的cDNA片段RT-PCR扩增 | 第95页 |
| ·Real-time PCR | 第95-96页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶基因荧光定量数据分析方法 | 第96页 |
| ·结果与分析 | 第96-98页 |
| ·偏肿革裥菌Lg-Lac1、Lg-Lac2及内参基因Lg-GPD目的片段的扩增 | 第96页 |
| ·不同浓度CuSO4溶液处理过程中Lg-Lac1和Lg-Lac2基因的表达 | 第96-97页 |
| ·本章小结 | 第97-98页 |
| 4 偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2基因全长在毕赤酵母中的表达 | 第98-115页 |
| ·材料 | 第98-100页 |
| ·菌种 | 第98页 |
| ·质粒 | 第98-99页 |
| ·主要试剂 | 第99页 |
| ·主要仪器设备 | 第99-100页 |
| ·方法 | 第100-105页 |
| ·培养基 | 第100页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2的完整CDS序列扩增 | 第100页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2重组质粒的构建 | 第100-104页 |
| ·转化Pichia pastoris | 第104-105页 |
| ·重组质粒pPICZB/Lac1和pPICZB/Lac2转化Pichia pastoris后的PCR验证 | 第105页 |
| ·结果与分析 | 第105-113页 |
| ·偏肿革裥菌漆酶Lg-Lac1和Lg-Lac2的完整CDS序列扩增 | 第105-109页 |
| ·重组质粒的构建 | 第109-111页 |
| ·转化Pichia pastoris | 第111-113页 |
| ·本章小结 | 第113-115页 |
| 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-127页 |
| 附录1 偏肿革裥菌Lg-Lac1和Lg-Lac2的cDNA核苷酸序列比对结果 | 第127-129页 |
| 附录2 偏肿革裥菌Lg-Lac1和Lg-Lac2的cDNA核苷酸序列同源性比对结果 | 第129-130页 |
| 附录3 偏肿革裥菌Lg-Lac1和Lg-Lac2'的基因组核苷酸序列比对结果 | 第130-132页 |
| 附录4 偏肿革裥菌Lg-Lac1和Lg-Lac2'的基因组核苷酸序列同源性比对结果 | 第132-133页 |
| 附录5 偏肿革裥菌Lg-Lac1'和Lg-Lac2'的5'非翻译区序列及比对结果 | 第133-134页 |
| 附录6 偏肿革裥菌Lg-Lac1'和Lg-Lac2'的3'非翻译区序列及比对结果 | 第134-135页 |
| 附录7 重组质粒pPICZB/Lg-Lac1和pPICZB/Lg-Lac2测序结果与PCR全 | 第135-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
