| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 研究背景 | 第12-53页 |
| 1.1 病毒诱导Ⅰ型干扰素表达的调控机制 | 第12-36页 |
| 1.1.1 天然免疫概述 | 第12-20页 |
| 1.1.2 宿主细胞对病毒的识别及Ⅰ型干扰素的诱导 | 第20-23页 |
| 1.1.3 MITA在抗病毒天然免疫反应中的作用 | 第23-26页 |
| 1.1.4 MITA和它的翻译后修饰 | 第26-32页 |
| 1.1.5 RNF26概述 | 第32-36页 |
| 1.2 细胞抗病毒天然免疫与亚细胞结构 | 第36-53页 |
| 1.2.1 过氧化物酶体与抗病毒天然免疫信号转导 | 第36-45页 |
| 1.2.2 过氧化物酶体的纯化 | 第45-49页 |
| 1.2.3 蛋白质组学相对定量 | 第49-53页 |
| 2 RNF26调控病毒诱导Ⅰ型干扰素产生的分子机制 | 第53-123页 |
| 2.1 立项依据 | 第53-54页 |
| 2.2 实验材料 | 第54-58页 |
| 2.2.1 细胞和刺激物 | 第54-55页 |
| 2.2.2 载体及构建载体相关材料 | 第55-56页 |
| 2.2.3 构建逆转录病毒细胞系相关材料 | 第56页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀实验和免疫印迹实验相关材料 | 第56-57页 |
| 2.2.5 体外泛素化实验相关材料 | 第57页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因实验相关材料 | 第57页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR相关材料 | 第57-58页 |
| 2.2.8 激光共聚焦显微镜观察荧光实验相关材料 | 第58页 |
| 2.2.9 亚细胞组分分离实验相关材料 | 第58页 |
| 2.3 实验方法 | 第58-66页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第58-59页 |
| 2.3.2 细胞瞬时转染 | 第59页 |
| 2.3.3 构建载体和提取质粒 | 第59-60页 |
| 2.3.4 构建细胞系 | 第60-61页 |
| 2.3.5 制备多克隆抗体和免疫前血清 | 第61-62页 |
| 2.3.6 免疫共沉淀和免疫印迹实验 | 第62-63页 |
| 2.3.7 泛素化实验 | 第63页 |
| 2.3.8 双荧光素酶报告基因实验 | 第63-64页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR实验 | 第64-65页 |
| 2.3.10 激光共聚焦显微镜观察荧光实验 | 第65页 |
| 2.3.11 亚细胞器组分分离 | 第65-66页 |
| 2.4 实验结果 | 第66-107页 |
| 2.4.1 RNF26是MITA的E3泛素连接酶 | 第66-70页 |
| 2.4.2 RNF26与MITA相互作用 | 第70-77页 |
| 2.4.3 RNF26靶向MITA的K150位点发生多聚泛素化修饰 | 第77-79页 |
| 2.4.4 RNF26催化MITA发生K11连接的多聚泛素化修饰 | 第79-85页 |
| 2.4.5 RNF26防止MITA发生K48连接的多聚泛素化修饰和降解 | 第85-95页 |
| 2.4.6 RNF26调节病毒诱导的Ⅰ型干扰素产生 | 第95-102页 |
| 2.4.7 RNF26影响IRF3蛋白的稳定性 | 第102-107页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第107-123页 |
| 2.5.1 实验结果小结 | 第107-110页 |
| 2.5.2 讨论 | 第110-123页 |
| 3 过氧化物酶体相关抗病毒天然免疫蛋白的筛选 | 第123-147页 |
| 3.1 立项依据 | 第123-124页 |
| 3.2 实验材料 | 第124-125页 |
| 3.2.1 细胞和刺激物 | 第124页 |
| 3.2.2 亚细胞组分分离实验相关材料 | 第124-125页 |
| 3.2.3 蛋白质定量、脱盐、双甲基化标记和质谱鉴定相关材料 | 第125页 |
| 3.2.4 双荧光素酶报告基因实验相关材料 | 第125页 |
| 3.3 实验方法 | 第125-130页 |
| 3.3.1 细胞培养、瞬时转染、双荧光报告基因实验和免疫印迹实验 | 第125-126页 |
| 3.3.2 差速离心法从培养的HepG2细胞中分离轻线粒体组分 | 第126页 |
| 3.3.3 连续密度梯度超速离心法从轻线粒体组分中分离过氧化物酶体 | 第126-127页 |
| 3.3.4 定量蛋白质组样品制备 | 第127-128页 |
| 3.3.5 双甲基化标记 | 第128页 |
| 3.3.6 SCX色谱分离 | 第128-129页 |
| 3.3.7 质谱分析与数据处理 | 第129-130页 |
| 3.4 实验结果 | 第130-143页 |
| 3.4.1 过氧化物酶体的富集 | 第130-131页 |
| 3.4.2 质谱鉴定结果和两次结果的相关性分析 | 第131-133页 |
| 3.4.3 鉴定蛋白的分组 | 第133-136页 |
| 3.4.4 候选蛋白的初步功能鉴定 | 第136-139页 |
| 3.4.5 部分候选蛋白的后续功能鉴定 | 第139-143页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第143-147页 |
| 3.5.1 实验结果小结 | 第143-144页 |
| 3.5.2 讨论 | 第144-147页 |
| 4 论文创新点与展望 | 第147-150页 |
| 参考文献 | 第150-164页 |
| 附录 | 第164-182页 |
| 攻博期间发表的科研成果目录 | 第182-183页 |
| 致谢 | 第183-184页 |
