| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词表 | 第6-9页 |
| 第1章 综述 | 第9-19页 |
| 1.1 同种异体移植物炎症因子-1(AIF-1) | 第9-13页 |
| 1.1.1 AIF-1的发现及其类似物 | 第9页 |
| 1.1.2 AIF-1基因定位及蛋白特性 | 第9-11页 |
| 1.1.3 AIF-1的表达及主要生物学功能 | 第11-13页 |
| 1.1.3.1 AIF-1的表达 | 第11页 |
| 1.1.3.2 AIF-1与细胞增殖 | 第11-12页 |
| 1.1.3.3 AIF-1与细胞迁移 | 第12-13页 |
| 1.2 大肠杆菌表达系统 | 第13页 |
| 1.3 腺病毒载体 | 第13-17页 |
| 1.3.1 腺病毒的一般特性 | 第13-14页 |
| 1.3.2 腺病毒载体的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4 C2C12细胞的分化 | 第17页 |
| 1.5 本实验研究内容及意义 | 第17-19页 |
| 第2章 hAIF-1基因克隆及原核表达 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第19页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 hAIF-1基因的克隆(TA克隆) | 第21-22页 |
| 2.2.2 pET-28a(+)-hAIF-1质粒构建 | 第22页 |
| 2.2.3 重组质粒的原核表达及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 重组蛋白的可溶性分析和蛋白纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 数据处理 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-29页 |
| 2.3.1 hAIF-1基因的克隆 | 第24-26页 |
| 2.3.2 pET-28a(+)-hAIF-1质粒构建 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组质粒的原核表达及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.4 重组蛋白的可溶性分析和蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第3章 hAIF-1基因重组腺病毒的构建及其对A549细胞增殖和迁移的影响 | 第31-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌株、质粒及细胞 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂及耗材 | 第31页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-39页 |
| 3.2.1 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 3.2.2 腺病毒穿梭质粒pDC315-EGFP-hAIF1的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.3 质粒的大量制备 | 第34-35页 |
| 3.2.4 重组腺病毒的包装 | 第35-36页 |
| 3.2.5 PCR鉴定重组病毒 | 第36页 |
| 3.2.6 重组腺病毒的扩增 | 第36页 |
| 3.2.7 重组腺病毒滴度的测定 | 第36-37页 |
| 3.2.8 RT-PCR和Western Blot分析hAIF-1在A549细胞中的表达 | 第37-38页 |
| 3.2.9 腺病毒感染A549细胞的增殖实验 | 第38-39页 |
| 3.2.10 腺病毒感染A549细胞的划痕实验 | 第39页 |
| 3.2.11 腺病毒感染A549细胞的Transwell实验 | 第39页 |
| 3.2.12 实验数据处理 | 第39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-45页 |
| 3.3.1 hAIF-1重组腺病毒穿梭质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.2 hAIF-1重组腺病毒的包装 | 第40-41页 |
| 3.3.3 hAIF-1重组腺病毒鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 hAIF-1重组腺病毒滴度的测定 | 第42页 |
| 3.3.5 RT-PCR和Western Blot分析hAIF-1在A549细胞中的表达 | 第42页 |
| 3.3.6 hAIF-1重组腺病毒对A549细胞增殖的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.7 hAIF-1重组腺病毒感染A549细胞的划痕实验 | 第43-44页 |
| 3.3.8 hAIF-1重组腺病毒感染A549细胞的Transwell实验 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-48页 |
| 第4章 AIF-1在C2C12细胞分化过程中的表达 | 第48-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 小鼠成肌细胞C2C12分化模型的建立 | 第48页 |
| 4.2.2 C2C12细胞分化过程中AIF-1表达状态分析 | 第48-49页 |
| 4.2.3 实验数据处理 | 第49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-51页 |
| 4.3.1 小鼠成肌细胞C2C12分化模型的建立 | 第49-50页 |
| 4.3.2 C2C12细胞分化过程中AIF-1表达状态分析 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
