| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 手性药物与手性醇 | 第12-15页 |
| 1.1.1 手性药物 | 第12-14页 |
| 1.1.2 手性醇 | 第14-15页 |
| 1.2 手性醇的合成方法 | 第15页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第15页 |
| 1.2.2 生物合成法 | 第15页 |
| 1.3 醇脱氢酶 | 第15-20页 |
| 1.3.1 醇脱氢酶的概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 醇脱氢酶催化不对称还原的机理 | 第16-17页 |
| 1.3.3 影响立体选择性的因素 | 第17-18页 |
| 1.3.4 醇脱氢酶在手性醇合成中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3.5 醇脱氢酶的筛选方法 | 第19-20页 |
| 1.4 辅酶再生研究 | 第20-24页 |
| 1.4.1 辅酶特异性 | 第20页 |
| 1.4.2 辅酶再生循环 | 第20-23页 |
| 1.4.3 辅酶再生催化剂形式 | 第23-24页 |
| 1.5 本课题目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 醇脱氢酶基因的挖掘 | 第27-43页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第27页 |
| 2.2.2 分子实验试剂盒及工具酶 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要试剂及配方 | 第28-30页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.3.1 醇脱氢酶基因的扩增 | 第31页 |
| 2.3.2 胶回收 | 第31-32页 |
| 2.3.3 双酶切 | 第32页 |
| 2.3.4 质粒与目的基因连接 | 第32页 |
| 2.3.5 连接产物转化 | 第32-33页 |
| 2.3.6 阳性单克隆菌落的筛选 | 第33页 |
| 2.3.7 质粒提取 | 第33页 |
| 2.3.8 质粒的转化 | 第33页 |
| 2.3.9 醇脱氢酶的异源表达 | 第33-34页 |
| 2.3.10 酶的筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.11 分析方法的建立 | 第35-37页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第37-41页 |
| 2.4.1 酶基因的挖掘与表达菌株的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.2 目的基因的表达 | 第38-39页 |
| 2.4.3 酶的筛选结果 | 第39页 |
| 2.4.4 LCRⅢ的氨基酸序列分析 | 第39-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 醇脱氢酶LCRⅢ的酶学性质的研究 | 第43-55页 |
| 3.1 前言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.2.1 主要试剂及配方 | 第43页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.3.1 目的蛋白的纯化及浓度测定 | 第44页 |
| 3.3.2 酶活测定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 辅酶依赖型的测定 | 第45页 |
| 3.3.4 最适温度与温度稳定性的测定 | 第45页 |
| 3.3.5 最适pH与pH稳定性的测定 | 第45页 |
| 3.3.6 金属离子对酶活的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.7 底物谱的测定 | 第46页 |
| 3.3.8 动力学参数的测定 | 第46页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第46-54页 |
| 3.4.1 LCRⅢ的蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 3.4.2 LCRⅢ的蛋白浓度测定 | 第47页 |
| 3.4.3 辅酶依赖型的测定 | 第47-48页 |
| 3.4.4 LCRⅢ的最适温度及pH研究 | 第48-49页 |
| 3.4.5 LCRⅢ的热稳定性及pH稳定性研究 | 第49-50页 |
| 3.4.6 金属离子对LCRⅢ活性的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.7 LCRⅢ的底物谱 | 第51-53页 |
| 3.4.8 LCRⅢ的动力学常数测定 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 不对称还原合成(R)-CHBE的酶法制备 | 第55-67页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 主要试剂及配方 | 第55-56页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 4.3.1 共表达菌株的构建 | 第56-57页 |
| 4.3.2 共表达菌株酶活测定及对比 | 第57-58页 |
| 4.3.3 发酵制备共表达、单菌表达菌株 | 第58-59页 |
| 4.3.4 两种辅酶再生循环体系催化制备手性醇 | 第59页 |
| 4.3.5 反应条件的优化 | 第59-60页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第60-65页 |
| 4.4.1 共表达菌株的构建与表达 | 第60-61页 |
| 4.4.2 共表达菌株酶活测定及对比 | 第61页 |
| 4.4.3 两种辅酶再生循环体系制备(R)-CHBE | 第61-62页 |
| 4.4.4 单水相催化的反应优化 | 第62-65页 |
| 4.4.5 产物纯化工艺 | 第65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 硕士期间论文专利发表情况 | 第76页 |